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分子植物育种
(
网络版
)
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online)
1039
新型制种模式中都具有很好的应用前景，将成为
再生繁殖利用的主要途径。
3
材料与方法
3.1
试验材料
经筛选，本研究以水稻雌性核不育突变型品系
(
fs, female sterility
)
及其野生型品系
(
FST
,
FEMAIE
STERILITY
)
、细胞质雄性不育系
(
滇粳优
5
号
A
(D5A))
、常规品种
(
黎榆
B)
和杂种
F
1
(
滇杂
37)
各
1
份为试验材料。研究于
2011
年至
2012
年在云南农
业大学
(25.0°N, 102.7°E, 1895 masl.)
和云南新平县
戛洒镇
(24.0°N, 101.3°E, 572 masl.)
不同稻作生态试
验田进行。
3.2
材料的处理与移植
头季稻收获后
7 d
以内，截取供试材料带有倒
1~
倒
3
节点休眠芽的离体稻杆；稻杆洗净后散播在
育苗床上并覆土，按水稻常规苗床育秧方法进行育
苗和管理，或稻杆洗净后用植物激素组合物浸泡
45~50 h
，再散播在育苗床上并覆土，按水稻常规苗
床育秧方法进行育苗和管理；待再生苗
3
叶
~4
叶期
移栽大田，按水稻常规大田栽培管理方法进行大田
栽培管理。
3.3
适宜植物激素及组合配比筛选
3.3.1
第一轮筛选
头季稻收获后
7 d
以内，截取供试材料带有倒
1~
倒
3
节点休眠芽的离体稻杆，洗净并等量混合各
材料的稻杆，分别用不同浓度的植物激素及组合溶
液浸泡
48 h
处理；将处理后的稻杆均匀散播在育苗
床上覆土，按水稻常规苗床育秧方法进行育苗和管
理；待再生苗
3
叶
~4
叶期分别统计出苗率，初筛出
较好的激素及组合溶液配比。
3.3.2
第二轮筛选
将获得的效果较好的激素及组合，方法同第一
轮筛选，经第二轮筛选出适宜的组合及配比。
3.4
测定项目
3.4.1
考察出苗率、干物重、穗长和穗粒数
3
叶
~4
叶期统计各材料稻桩、带休眠芽的离体
稻杆以及种子萌发的出苗率。分蘖盛期分别取长势
相当的各材料整株地上部分，先
100
℃烘箱中杀青
1 h
，然后置于
80
℃烘干至恒重，称重。成熟期考
察穗长和单穗谷粒数。
3.4.2
测定叶片叶绿素
分蘖盛期分别取各材料的新鲜叶片，去除叶脉
后用电子分析天平精确称量
0.05 g
，剪碎后浸泡于
装有
80%
丙酮的
20 mL
容量瓶中，做
3
次重复。
密封置于
4
℃冰箱中浸提叶绿素约
48 h
后，用
80%
的丙酮定容混匀，取浸提液用紫外可见分光光度计
测定波长
663 nm
、
646 nm
和
470 nm
浸提液吸光
值，按
Lichtenthaler (1987)
的方法，测定和计算叶
片单位鲜重的叶绿素
chla
、
chlb
和
β-Car
的含量。
3.4.3
测定叶面积
分蘖盛期分别取各材料的剑叶或倒二叶，按陶洪
斌和林杉
(2006)
的打孔称重法，用孔径
5 mm
的单孔
打孔器分别从距叶梢和叶柄
2 cm
处开始顺次打孔，
每片叶片共打孔
20
次，并注意避开中心叶脉和已经
枯萎的部分，将打下的圆形叶片计数并装入纸袋烘干
(75
℃下烘
48 h)
、称重
(W1,
单位
: g)
；打孔后的叶片
装入纸袋烘干、称重
(W2,
单位
: g)
。计算公式为：叶
面积
(cm
2
)=(W1+W2)×
打孔数
×
r
2
×10
-2
/W1
，其中：
r
为打孔器的半径，这里为
2.5 mm
。
3.
5
数据处理
数据处理和方差分析采用
Microsoft Excel
和
SPSS17.0
软件完成，图表中数据均为各处理的平
均值
±
平均值标准误。
作者贡献
吕永刚和李东宣是本研究的实验设计和实验研究的执
行人；吕永刚完成数据分析，论文初稿的写作；甘树仙、冯
德党、董陈文华、熊海波、朱骞、张小玲、魏振飞、曹迎杰、
张利东、伍腾飞参与部分大田试验及实验结果分析；陈丽娟
和李东宣是项目的构思者及负责人，指导实验设计，数据分
析，论文写作与修改。全体作者都阅读并同意最终的文本。
致谢
本 研 究 得 到 了
NSFC-
云 南 联 合 基 金 重 点 项 目
(U1136604)
、国家重点基础研究
973
项目
(2011CB1-00401
）
和云南省基金重点项目
(2006C006Z)
共同资助。
参考文献
Anger R.H.M., Prasad P.C., Laude H.M., 1973, Effects of
kinetin on tiller bud elongation in wheat (
Triticum
aestivum
L.), Ann. Bot., 37(3): 565-571
Cai C.J., and Chen S.N., 2001, Advanced in studying of plant
hormone, Yunnan Daxue Xuebao (Journal of Yunnan
University), 23: 99-101,112 (
蔡传杰
,
陈善娜
, 2001,
植
物激素的研究进展
,
云南大学学报
(
自然科学版
), 23:
99-101, 112)