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雷伟等：种植海拔差异对水稻雄配子体基因型的选择效应
1203
3.3
形态性状考察
亲本小麻谷和南
34
在
11
个形态性状上具有明
显差异
(
表
5)
，所以本试验调查各选择群体单株的这
11
个形态性状，包括
8
个数量性状，如田间株高
(cm)
、剑叶长
(cm)
、穂长
(cm)
、穂茎长
(cm)
、总粒
数
(
粒
/
穗
)
、秕粒数
(
粒
/
穗
)
、结实率
(%)
、着粒密度
(
穗
总粒数
/
穗长
)
，和
3
个质量性状，如颖尖颜色、颖
壳颜色和芒。质量性状调查群体单株有或无，无标
记为
1
，有标记为
2
。
3.4 PCR
标记分析
采用
CTAB
法提取叶片总
DNA
。用来自水稻
12
条染色体上的
200
对
SSR
引物分析亲本，筛选
出分布于
4
条染色体的
7
对引物在亲本间具有多态
性。利用这
7
对引物对来自不同海拔的选择群体进
行分析。
PCR
反应体系为
13 μL
，其中
2×power Tap
PCR MasterMix 6.5 μL
，
ddH
2
O 4.9 μL,
前后引物各
0.3 μL (10 pmol/mL)
，
DNA
模板
1 μL (20~40 ng)
。
扩增程序：
94
℃预变性
5 min
，
94
℃变性
30s
，
53
℃
~61
℃退火
30 s
，
72
℃延伸
50 s~1 min
，
35
个循环，
72
℃延伸
5 min
。
PCR
产物在
2%~2.5%
的琼脂糖凝
胶上电泳，紫外灯下观察并照相。
3.5
数据统计分析
各选择群体形态性状的差异性，正态性检验
(Shapiro-Wilk)
，卡平方
(χ
2
)
检验
, Shannon-Weiner
形
态性状多样性指数
(H
s
=−ΣP
i
InP
i
)
，等均采用
DPS
分
析软件统计。
分子位点统计，将各选择群体单株的带型按照
亲本归类，与亲本小麻谷带型相同的记为
0
，与亲
本南
34
带型相同的记为
1
。按照孟德尔分离的理论
比例
(1:1)
进行卡方检验，推断被检测分子位点是否
发生遗传偏分离。
表
5
两个亲本
11
个形态性状的比较
Table 5 Comparison of eleven morphological traits between two parents
性状
Trait
小麻谷
Xiaomagu
南
34
Nan34
T
测验
T test
平均数
±
标准差
Mean±SD
平均数
±
标准差
Mean±SD
T
检验值
T-value
显著性
p
株高
PH
156.46±6.6
83.43±4.7
41.0
0.00
剑叶长
FL
39.06±6.1
29.26±3.7
6.2
0.00
穗长
PL
26.49±2.7
22.88±2.7
4.2
0.00
穗茎长
PE
12.54±3.4
-
1.75±1.1
18.0
0.00
秕粒数
UG
27.30±11.8
78.76±18.9
10.4
0.00
总粒数
TG
147.70±19.1
189.71±41.1
4.2
0.00
结实率
SS
81.58±7.3
61.34±9.1
7.8
0.00
着粒密度
TSD
5.63±0.9
9.08±1.6
8.4
0.00
颖尖色
TC
紫色
Purple
白色
White
谷壳色
GC
紫色
Purple
白色
White
顶芒
TA
无
No
有
Yes