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分子植物育种
(
网络版
)
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online)
1179
3.2
基因组
DNA
的提取
在苗期采摘无病虫害辣椒嫩叶提取基因组
DNA
，提取方法参照
CTAB
法，试验所用的
Taq
DNA
聚合酶、缓冲液和
dNTP
均购自上海
Sangon
公司，
ISSR
引物
(
表
1)
也由上海
Sangon
公司合成。
3.3 ISSR-PCR
反应
ISSR
反应体系为：
10×PCR buffer 2.0 μL
，
25 mmol/L
MgCl
2
1.6 μL
，模板
(40 ng/μL) 1.0 μL
，引物
(10 μmol/L) 1.0 μL
，
Taq
酶（
5 U/μL
）
0.2 μL
，
2.0 mmol/L
dNTPs 1.6 μL
。加
ddH
2
O
补足
20 μL
。
ISSR-PCR
反应
程序为：①
94
℃变性
3 min
；②
94
℃
30 s , 52
℃
/54
℃
30 s
，
72
℃
1.5 min
，
38
循环；③
72
℃延伸
10 min
。④
4
℃保存。
PCR
产物在
6%
的聚丙烯酰胺
上电泳，并进行简单快速的
DNA
银染。
3.4
数据统计与处理
将电泳好染色，洗好的聚丙烯酰胺凝胶转移到
玻璃板上，在灯箱上读带，记录下各个引物在辣椒
材料中稳定扩增且清晰的条带数目，相同迁移距离
的片段用“
1
”表示，无带用“
0
”表示。将统计好
的数据用聚类分析软件
NTsys 2.10e
软件进行聚类
分析及主坐标分析。应用
POPGENE 1.32
程序进行
数据处理，并进行下列参数统计：
(1)
多态位点百分
率
(
P
)
；
(2)Nei's
基因多样性指数
(
h
)
；
(3)Shannon
信
息指数
(
I
)
；
(4)
基因分化系数
(
Gst
)
和基因流
(
Nm
)
；
(5)Nei’s
遗传距离
(
D
)
和遗传一致度
(
NGI
)
。
作者贡献
徐小万、徐晓美是本研究的实验设计和实验研究的执
行人；李涛完成数据分析，论文初稿的写作；王恒明参与实
验设计，试验结果分析；李颖、罗少波是项目的构思者及负
责人，指导实验设计，数据分析，论文写作与修改。全体作
者都阅读并同意最终的文本。
致谢
本研究由广东省科技计划项目
(2010B020304001,
2011B020303001, 2012B040400007)
、广东省农科院院长基
金项目
(201108)
和现代农业产业技术体系建设专项
(CARS-25-G-36)
共同资助。
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