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唐有福等：元阳梯田原位保护与种子库保存水稻地方品种的遗传多样性比较
1012
YLG-1~5-
in situ
，
BJLJ-1~5-
in situ
，
HJLJ-1~5-
in situ
；
YLG-1~5-seed bank
，
BJLJ-1~5-seed bank
，
HJLJ-1~5-seed
bank
。
3.2 DNA
提取及
PCR
产物检测
供试材料经表面消毒、浸种、发芽、水培
15 d
，
随机选取
10
株剪取嫩叶，参照高东等
(2010)
的
CTAB
法提取
DNA
，测定
DNA
浓度。
PCR
反应体
系
(20 μL)
含
1× Buffer
，
0.2 mmol/L dNTP (
每一成分
均为
0.2 mmol/L)
，
1 μmol/L SSR
引物，
50 ng
模板
DNA
及
1 U
Taq
酶。扩增程序为：
94
℃
2 min
；
94
℃
40 s
，
55
℃
30 s
，
72
℃
40 s
，
36
个循环；
72
℃延伸
10 min
。扩增结果检测采用
6%
聚丙烯酰胺变性凝胶
电泳及银染法
(
高东等
, 2009a)
。
3.3
数据统计
按基因型统计
SSR
扩增带型，并建立相应的数
据库
(
高东等
, 2011)
。采用
POPGENE(Yeh et al., 1999)
软件计算等位基因位点数
(
A
)
，遗传相似系数，有效
等位基因位点数
(
Ae=1/Σ(pi)
2
，多态性信息量
(
PIC
＝
1-Σ(pi)
2
，基因型多样性
(
H′= –ΣPilnPi
。式中
Pi
为
第
i
个多态位点上的基因频率。
NTSYS
程序
(Rohlf,
1997)
软件完成参试材料间欧氏距离计算，采用非加
权平均数
(UPGMA)
，依据遗传相似系数绘制树状聚
类图。
作者贡献
高东为本研究的构思者及负责人，试验设计和试验研究
的执行人；唐有福参与样品采集，试验设计与分析，及论文
初稿的写作；何霞红和白筱参与数据分析及论文修改。全体
作者都阅读并同意最终的文本。
致谢
本研究由国家重点基础研究发展计划
(973
项目
)
课题
(2011CB100406)
资助。
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