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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1535
-
1541
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1535
-
1541
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1536
异性育种领域的应用。
对茶树种质的遗传特性进行有效的鉴定和评价，
有利于提高茶树种质资源研究与利用的水平。分子
标记技术可用于研究了解茶树基因遗传变异情况、茶
树居群分布及其进化关系，可增加茶树育种的针对
性，提高育种效率。在茶树种质遗传多样性和种质亲
缘关系研究方面，
DNA
分子标记技术有着广泛的应
用，并以其扩增多态性丰富、准确性高、重复性好、
不受器官发育时期的特异性以及环境影响且易于
分析等特点，在种质鉴定和遗传基础分析等研究领
域具有较大潜力
(
王建波
, 2002)
。
RAPD
分子标记基
于
PCR
技术基础，可应用于构建物种的
DNA
指纹
图谱并利用其进行种质鉴定、分析评价物种亲缘关系
的远近以及物种进化演进等研究
(
李娟等
, 2005)
。目
前，
RAPD
技术已用于甘薯
(
王红意等
, 2009)
、小麦
(
程
保山等
, 2011)
、黄瓜
(
刘丽娟等
, 2009)
、黄芪
(
高霞等
,
2011)
、百合
(
童巧珍等
, 2010)
等植物的基因指纹图谱
和种质亲缘关系鉴定等研究，在茶树系统进化和演
变、茶树亲缘关系鉴定评价等方面，
RAPD
技术也以
其扩增多态性好，扩增效果稳定，可直接反映茶树在
基因水平上的变化和差异等特点，广泛应用于茶树遗
传多样性及亲缘关系
(
林政和等
, 2006;
黎星辉等
,
2007;
李娟等
, 2005;
王雪萍等
, 2007)
、特异性茶树
种质筛选鉴定
(
王会等
, 2008;
李开荣等
, 2007,
浙江
农业科学
, (1): 50-55)
等研究领域。
本研究基于
RAPD
分子标记技术构建了
30
份福
建闽南乌龙茶茶树种质的
DNA
指纹图谱，研究了供
试种质的遗传多样性，揭示了
30
份茶树种质的遗传
亲缘关系，为有效鉴定和分析乌龙茶茶树种质资源遗
传性状，筛选适宜的亲本进行育种研究提供科学依
据，也为保护部分优异乌龙茶茶树种质资源的知识
产权提供理论参考。
1
结果分析
1.1 RAPD
引物扩增多态性分析
筛选出的
10
条扩增多态性较好、条带清晰的引
物在
30
份茶树种质中共扩增出
103
条谱带，其中
80
条为多态性谱带，多态性比率达到
77.67%
。从表
1
中可以看出，不同引物扩增储的多态性条带在
6~13
条之间，平均每条引物扩增出
8
条多态性条带，这说
明供试茶树种质具有较为丰富的遗传多样性。使用不
同引物扩增获得的条带数量在
9~15
条之间，平均每
个引物扩增出
11.36
条；其中引物
S183
扩增出
13
个
位点的条带，扩增条代数最多
(
图
1)
。由此可可知，采
用
RAPD
分子标记方法用于乌龙茶茶树种质资源指
纹图谱的构进而区分不同茶树种质是可行的。
1.2
闽南龙茶茶树种质指纹图谱
应用分子标记技术鉴别种质，使用尽可能少的扩
增引物数量获得最高效的鉴别效果尤为重要
(
刘本英
等
, 2008)
。本实验筛选出的
10
条引物中，
S118
、
S294
、
S183
、
S467
、
S481
等引物均产生了丰富的谱带类型
(
表
2)
，在鉴别试验供试样品中表现出高效性，如利
用引物
S118
和
S294
所产生的特异型谱带，均可独
立鉴别出
30
份乌龙茶茶树种质中的
24
份种质，利
用引物
S183
的特异型谱带则可鉴别出
17
份种质
同时，应用不同引物组合也能有效鉴别出供试
表
1
不同引物对
PCR
扩增产物的多态性
Table 1 Polymorphism of PCR amplification products amplified by different primers
引物编号
引物序列
扩增位点数
多态性位点
多态性比率
(%)
Primer No.
Primer sequence
Amplified loci
Loci
Loci rate (%)
S113
GACGCCACAC
10
6
60.00
S118
GAATCGGCCA
12
10
83.33
S154
TGCGGCTGAG
7
6
85.71
S167
CAGCGACAAG
9
6
66.67
S180
AAAGTGCGGC
9
7
77.78
S183
CAGAGGTCCC
13
13
100.00
S294
GGTCGATCTG
12
10
83.33
S467
GTCCATGCCA
12
10
83.33
S481
GGGACGATGG
10
6
60.00
S492
AGTAGGGCAC
9
6
66.67
总计
103
80
77.67
Total