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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1518-1525
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1518-1525
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1524
66.7%~83.3%
以内、果实甜度与对照相差
0.8%~1.2%
以内；
3
级别：亲和性差，群体嫁接成活率
70%
以下
或单株死亡，坐瓜率
66.7%
以下、果实甜度与对照
相差
1.2%
以下。
调查过程为：以
85-1
和
B717
为亲本产生
F
3
群体
中每个家系取一个植株苗作接穗分别与砧木“壮
士”采用插接法嫁接
[
以自根苗
(85-1, B717
及其由它
们为亲本产生
F
2
各单株
)
作为对照
]
；分别于
4
月
20
日
和
4
月
27
日播种接穗和砧木，
5
月
11
日进行嫁接。
5
月
23
日调查嫁接植株成活率，定植于日光温室中，
高畦栽培，每畦定植双行，株距
40 cm
，黑色地膜
覆盖，采用滴灌方式浇水；
6
月
23
日调查坐瓜率，
7
月
25
日考察果实的甜度。
3.3
亲和性优差池的建立、
DNA
的提取和检测
插接操作中将甜瓜接穗上被切下的根和茎材
料搜集于
-80
度储存备用。调查各嫁接苗成活率、坐
瓜率、果实甜度亲和性指标并做对应亲和性级别划
分。搜集甜瓜接穗中表现亲和性优
(0
级
)
和亲和性差
(3
级
)
的对应
F
2
植株
DNA
各
10
份，分别随机各取
6
份
单独混合建成亲和性优、差
DNA
池各
3
个。
DNA
提取方法使用改良的
CTAB
方法，用
0.8%
琼脂糖凝胶电泳进行质量检测。
3.4 PCR
扩增和电泳检测
反应体系：
25 μL
，
2
×
Taq
PCR Master Mix 12.5
μL (
生物公司提供
) (10
×
Buffer (
含
20 mmol/L
的
Mg
2+
); 0.5 μL dNTPs (2.5 mmol/L)
；
0.2 μL Easy
Taq
DNA
聚合酶
(2.5 U/μL))
；
40.5 ng/μL
的模板
DNA 1
μL
；前后引物
(30 ng/μL)
各
1 μL
；最后加入
9.5 μL
ddH
2
O
补齐。
PCR
反应在基因扩增仪
(
生物科技公司
生产
)
上进行。
PCR
反应程序：
94
℃预变性
3 min
；
然后
94
℃变性
30 s
，
55
℃退火
30 s
，
72
℃延伸
1 min
，
35
个循环；最后
72
℃再延伸
5 min
，
4
℃保存待测。
扩增产物用
1.5%~2%
的琼脂糖凝胶电泳检测，
EB
染
色，
100 V
恒压下
1
×
TAE
缓冲液中电泳
90 min
左右，
紫外灯下观察记录带型并拍照。
3.5
引物筛选
由上海生工合成文献发表的
750
对
SSR
、
AFLP
、
SRAP
引物
(Fernandez-Silva et al., 2008; Fukino et al.,
2008; Ren et al., 2009)
对亲和性优差池进行筛选。
作者贡献
陈亚丽和刘龙洲是本研究的实验设计和实验研究的执
行人；陈亚丽完成数据分析，论文初稿的写作；刘龙洲和朱
为民参与实验设计，试验结果分析；刘龙洲、朱为民、郭世
荣和陈幼源是项目的构思者及负责人，指导实验设计，数据
分析，论文写作与修改，参与了论文的校对和定稿等。全体
作者都阅读并同意最终的文本。
致谢
本研究由国家自然科学基金项目
(31000915)
、上海市重
点学科
(
蔬菜学
-
交通大学
)
建设项目
(B209)
和上海市启明星
人才计划
(11QA1405700)
共同资助。作者感谢上海市农业科
学院园艺所提供实验平台，能够进行各项试验、完成本研究
工作，在此深表感谢。
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