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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1493-1496
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1493-1496
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1495
素含量下降的多少有一定的关系，木质素含量下降
越显著，淡红色就越深。这种现象在其他一些人的
研究中也有报道
(Zhong et al., 2000; Piquemal et al.,
l998; Halpin et al., 1994)
。
许多研究结果已经表明，
COMT
基因的表达被
抑制后，木质素的生物合成受到影响，导致木质素
的含量或组成发生改变，本文的研究结果也证实了
这一点。但木质素组份与含量的变化与
COMT
被抑
制的程度是否存在相关性还不是很清楚，这方面的
研究结果并不是一致的。在
Sewalt
等
(1997)
和
Ni
等
(1994)
的研究中，
COMT
活性被抑制越高，转基因
植株木质素含量下降越多。但也有一些人的研究不
支持这种变化趋势，
Doorsselaere
等
(1995)
、
Lapierre
等
(1999)
和
Tsai
等
(1998)
都发现，转基因植株的木质
素含量与
COMT
活性被抑制程度没有关系，即使
COMT
活性被抑制达到
70%
时，木质素含量却没有
明显变化。
3
材料与方法
3.1
转化材料
烟草组培苗，品种为红花大金元。
3.2
反义表达载体的构建
通过
PCR
扩增在
BoCOMT1
基因两端分别加上
Xba
Ⅰ和
Kpn
Ⅰ识别位点，然后反向插入同样带有这
两个识别位点的植物表达载体
PBI121
中
(
图
3)
，经过
酶切验证后，利用电击法将质粒转入农杆菌中。
图
3
BOCOMT1
基因插入植物表达载体
PBI121
的示意图
Figure 3 A diagram of
BOCOMT1
gene inserting into plant ex-
pression vector PBI121
3.3
烟草的叶盘法转化及转基因植株的培养
先将烟草在
25
℃培养室中进行无菌培养，然后
挑选生长状态良好的叶片，剪成
1 cm
2
的小块，在农
杆菌液中浸染
3~5 min
。取出后用滤纸吸干，在分化
培养基上使其分化出烟草幼苗。然后转到生根培养
上进行生根诱导，形成一个完整的转基因植株。当
转化的烟草幼苗长到
2~3 cm
时，将其转移到培养钵
中继续培养。
3.4
转基因烟草的
PCR
检测
以
CTAB
法提取对照及转基因烟草的基因组
DNA
，然后利用
PCR
方法检测目的基因是否已经转
入烟草的基因组中。
3.5
转基因烟草木质素含量的测定
按照国标
GB/T 2677.8-1994
测定木粉中酸不溶
木质素的含量。
作者贡献
李雪平是本研究的试验设计和实验研究的执行人，完成
数据分析及论文初稿写作；彭镇华指导试验设计，数据分析，
论文写作与修改；高志民、胡陶参与部分试验结果分析。全
体作者都阅读并同意最终的文本。
致谢
感谢河北农业大学陈段芬教授在实验过程中的帮助。
参考文献
Atanassova R., Favet N., Martz F., Chabbert B., Tollier M.,
Monties B., Fritig B., and Legrand M., 1995, Altered
lignin composition in transgenic tobacco expression
O-methyltransferase sequence in sense and antisence of
itation, Plant Journal, 8(4): 465-477 http://dx.doi.org/10.
1046/j.1365-313X.1995.8040465.x
Boerjan W., Ralph J., and Baucher M., 2003, Lignin biosynthe-
sis, Annu. Rev. Plant Biol., 54: 519-546 http://dx.doi.org/
10.1146/annurev.arplant.54.031902.134938 PMid:14503002
Doorsselaere J.V., Baucher M., Chognot E., Chabbert B.,
Tollier M., Petit-Conil M., LepléJ., Pilate G., Cornu D.,
Monties B., Montagu M.V., Inzé D., Boerjan W., and
Jouanin L., 1995, A novel lignin on poplar trees with a
reduced caffeic acid/ 5
-
hydroxyferulic acid O-methyltran-
sferase activity, Plant Journal, 8(6): 855-864 http://dx.doi.
org/10.1046/j.1365-313X.1995.8060855.x
Dwivedi U.N., Campbell W.H., Yu J., Datla R.S., Bugos R.C.,
Chiang V.L., and Podila G.K., 1994, Modification of lignin
biosynthesis in transgenic Nicotiana through expression of
an antisense O-methylltransferase gene from popalus,
Plant Mol. Biol., 26(1): 61-71 http://dx.doi.org/10.1007/
BF00039520 PMid:7948906
Guo D.J., Chen F., Inoue K., Blount J.W., and Dixon R.A., 2001,
Down-regulation of caffeic acid 3
-
O-methyhransferase and
caffeoyl CoA 3
-
O-methyltransferase in transgenic alfalfa:
Impacts on lignin structure and implications for the