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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1447
-
1457
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1447
-
1457
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1451
表
6
不同温度对供试水稻成熟胚出愈率的影响
Table 6 Effects of different temperature on the rates of callus induction of rice
水稻品种
培养温度
(
℃
)
接种数目
21d
后的出愈率
(%)
Rice variety
Culture termperature (
℃
)
Inoculation number
Callus induction rate after 21 d (%)
PC
22±2
57±2
42.20±0.50
28±1
48±2
92.30±0.60
30±1
48±2
75.20±0.70
WT
22±2
53±3
51.20±0.30
28±1
48±2
100.00±0.00
30±1
48±2
94.20±0.40
注
:
表
6
中使用的培养基是以基本培养基
N6
的大量元素
+
微量元素
+
有机成份为基本培养基
,
再添加
2 mg/L 2,4
-
D, 1 mg/L
ABA, 0.3 mg/L
水解酪蛋白
, 2.8 mg/L
脯氨酸
, 30 g/L
蔗糖和
8 g/L
琼脂
, pH 5.8,
愈伤组织诱导温度
(28±1)
℃
Note: Medium used in figure 6 was supplemented with 2 mg/L 2,4
-
D, 1 mg/L ABA, 0.3 mg/L casein hydrolysate, 2.8 mg/L proline,
30 g/L sugar and 8 g/L agar based on basic medium including the large elements of N6 medium plus trace elements and organic
ingredients, pH 5.8, induction temperature at (28±1)
℃
表
7
表明，在
7 g/L
琼脂浓度的诱导培养基上，
PC
的愈伤组织生长最快，且诱导出均是适合悬浮
培养的米粒状愈伤组织。
8 g/L
的琼脂浓度则生长速
度则慢于
7 g/L
的琼脂浓度的，愈伤的组织形态与
7 g/L
的琼脂浓度的类似，而琼脂浓度为
9 g/L
的培养基上，
不仅愈伤组织生长缓慢，而且诱导的愈伤组织多为
湿润且大块的，不适合悬浮培养的继续培养的细胞
状态
,
可见，从生长速度和形态上分析，
7 g/L
的琼脂
浓度最有利于快速诱导出米粒状的愈伤组织
(
图
1)
。
图
1
不同琼脂浓度对供试水稻愈伤组织生长和形态的影响
Figure 1 Effects of different agar concentrations on vegetative
state of rice callus
1.6
继代培养对供试水稻愈伤组织生长和形态状态
的调节
对于高频水稻悬浮培养体系而言，不仅要求其
愈伤组织更分散，更疏松，而且要求愈伤组织有快
速的生长能力，因此，水稻成熟胚诱导愈伤组织的
继代能力是建立高频和稳定的水稻悬浮培养技术
体系的前提和基础。尤其与以水稻幼胚和幼穗为外
植体所诱导的愈伤组织比较，成熟胚诱导的更容易
褐化，继代培养更困难
(
方文娟等
, 2005)
。从表
8
看
出，将
WT
种子接种于
M2
的培养基中诱导
,
其愈伤
组织转入继代培养基
M1 (
降低了
2,4
-
D,
增加了
6
-
BA),
可降低褐化率，
2
次继代于
M16
的培养基中
(
再次降低了
2,4
-
D
和
6
-
BA
浓度
)
，则可培养出数
量较多且为米粒状的愈伤组织。将
WT
种子接种于
M3
的培养基中诱导，愈伤组织转入继代培养基
M4
(
也降低了
2,4
-
D
和
6
-
BA
的浓度
)
，同样可显著降
低褐化率，继续降低
2,4
-
D
和
6
-
BA
的浓度
,
可培养
出较多米粒状愈伤组织。
PC
的继代过程采用类似
的方法也可获得较多米粒状愈伤组织，可见，渐次
降低
2,4
-
D
浓度，适当增减
6
-
BA
的浓度，有利于
诱导长出适合水稻悬浮培养的米粒状愈伤组织。
1.7
供试水稻悬浮细胞系的生长曲线
将米粒状且生长均匀的水稻悬浮细胞继代于
不同
2,4
-
D
浓度，溶氧量和新原液比例的培养基中
培养，然后测定水稻悬浮细胞的生物量。结果表明：
在含有
2 mg/L 2,4
-
D
的激素下，供试水稻悬浮细胞
生物量增殖的最快，表现为其净鲜重和净干重都最
大
(
表
9)
。表
10
显示
2:1
、
3:1
和
4:1
等不同浓度的
新原液比例均对悬浮细胞生长有轻微影响，其中新
原液比例为
3:1
时，干重累积最高，
2:1
时次之，
4:1
时最低。表
11
则表明
100 mL
三角瓶中接种
20 mL
的培养液，其中的悬浮细胞生长最快，干重累积最
大，两供试材料
PC
和
WT
的表现均类似。