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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1414
-
1421
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1414
-
1421
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1420
图
8
果实不同发育时期果肉色及
CsZds
基因相对表达量分析
注
: a:
花
; b:
茎
; c:
叶
Figure 8 flesh color at different stages and real-time expression
analysis of
CsZds
gene
Note: a: Flower; b: Stem; c: Leaf
果肉
(
授粉后
20 d, 30 d, 40 d, 50 d, 60 d
和
70 d)
、结
果盛期的花、叶、茎，以及普通黄瓜
(JD7) 5
个不同时
期的果肉
(
授粉后
20 d, 30 d, 40 d, 50 d
和
60 d)
总
RNA
，参照已克隆序列，设计
CsZds
基因的实时荧光
定量引物
qZdsF
：
5'
-
AATGGATGGGTGACAGAA
-
3'
；
qZdsR
：
5'
-
CCTCGGGAGACGTTAGTG
-
3'
，内参基因
Actin
的特异性引物参照孙晓琦
(2008)
合成，
ActinF
：
5'
-
CCACGAAACTACTTACAACTCCATC
-
3'
；
ActinR
：
5'
-
GGGCTGTGATTTCCTTGCTC
-
3'
。
RNA
经
1%
琼脂糖凝胶电泳检测合格后，反转录成
cDNA
第一
链。荧光定量试剂盒购自于
TransGen
公司的
Trans
-
Start
TM
Green qPCR SuperMix
，反应体系为：
5 µL RT
产物稀释液，
0.5 µL
引物，
1
×
TransStart
TM
Green
qPCR SuperMix
，
1
×
Passive Reference Dye/PCR
Enhancer
，终体积为
25 µL
，
3
次重复。在
ABI Step One
荧光定量
PCR
仪进行实时荧光定量
PCR
分析。反
应程序为：
95
℃
30 s
，以激活
TransStart Taq
热启动
酶，之后
95
℃
5 s
，
55
℃
15 s
，
72
℃
10 s
，
40
次循环。
目标基因的相对表达水平采用
2
-
△△
CT
法计算。
作者贡献
王柬人是本研究的实验设计和实验研究的执行人并完
成数据分析，论文初稿的写作；李锡香、王海平、邱杨、宋
江萍、张晓辉参与实验设计，试验结果分析；沈镝是项目的
构思者及负责人，指导实验设计，数据分析，论文写作与修
改。全体作者都阅读并同意最终的文本。
致谢
本研究由国家自然科学基金项目
(31071797)
和农业部
园艺作物生物学与种质创制重点实验室项目共同资助。
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