Basic HTML Version
分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1032
-
1037
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1032
-
1037
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1032
研究报告
A Letter
栽培种花生乙酰
ACP
硫酯酶基因
(
AhfatB
)
克隆及表达载体构建
李晓斐
,
万勇善
,
刘风珍
作物生物学国家重点实验室
,
山东省作物生物学重点实验室
,
山东农业大学
,
泰安
, 271018
通讯作者
: yswan@sdau.edu.cn; liufz@sdau.edu.cn
作者
分子植物育种
, 2012
年
,
第
10
卷
,
第
5
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2012.10.0005
收稿日期：
2012
年
02
月
08
日
接受日期：
2012
年
02
月
21
日
发表日期：
2012
年
03
月
01
日
这是一篇采用
Creative Commons Attribution License
进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用
,
版权所有人允许并同意第三方无条件的
使用与传播。
建议最佳引用格式：
引用格式
(
中文
)
：
李晓斐等
, 2012,
栽培种花生乙酰
ACP
硫酯酶基因
(
AhfatB
)
克隆及表达载体构建
,
分子植物育种
(online) Vol.10 No.5 pp.1032-1037 (doi: 10.5376/mpb.
cn.2012.10.0005)
引用格式
(
英文
)
：
Li X.F., et al., 2012, Cloning of
AhfatB
encoding Acyl-ACP thioesterase in Peanut (
Arachis hypogaea
L.) and constructing its expression vector, Fenzi Zhiwu
Yuzhong (online) (Molecular Plant Breeding) Vol.10 No.5 pp.1032-1037 (doi: 10.5376/mpb.cn.2012.10.0005)
摘
要
本研究以花生栽培品种山花
7
号叶片
DNA
为模板进行
PCR
扩增，克隆获得花生乙酰
ACP
硫酯酶基因
(
AhfatB
) DNA
序列，序列全长
2 720 bp
，编码区位于
124 bp~2 341 bp
，开放阅读框全长
1 242 bp
，编码
413
个氨基酸，基因内存在
3
个内
含子分别位于
607~754 bp
、
878~1 495 bp
和
1 607~1 828 bp
。提取花生幼果
RNA
，经
RT-PCR
扩增，得到
AhfatB
基因的全
长
cDNA
，将其与
PBI121
表达载体
35S
启动子连接，替换其中的
GUS
基因，构建了植物表达载体
PBI121-
AhfatB
。
关键词
花生；乙酰
ACP
硫酯酶；基因克隆；表达载体
Cloning of
AhfatB
Encoding Acyl-ACP Thioesterase in Peanut (
Arachis
hypogaea
L.) and Constructing its Expression Vector
Li Xiaofei , Wan Yongshan , Liu Fengzhen
State Key Laboratory of Crop Biology, Shandong Key Laboratory of Crop Biology, Shandong Agricultural University, Taian, 271018
Corresponding author, yswan@sdau.edu.cn; liufz@sdau.edu.cn
Authors
Abstract
In this research
,
the DNA extracted from leaves of cultivar Shanhua7 was used as a template for PCR, and the full-length
DNA sequence of
AhfatB
was amplified. It is 2 720 bp in length that contains the coding region from 124 bp to 2 341 bp. The open
reading frame of the sequence is 1 242 bp encoding a protein with 413 amino acids. There are three introns in this gene, of which is
located in the range from 607 bp to 754 bp, from 878 bp to 1 495 bp, and from 1 607 bp to 1 828 bp, respectively. The total RNA
extracted from immature peanut seeds was used for RT-PCR to amplify the full-length cDNA of
AhfatB
. The cDNA gene was ligated
to the 35S promoter in the PBI121 expression vector by replacing the GUS gene of the PBI 121 expression vector to generate the
plant expression vector PBI121-
AhfatB
.
Keywords
Peanut (
Arachis hypogaea
L.); acyl-ACP thioesterase; Gene cloning; Expression vector
研究背景
植物体中脂肪酸的合成主要发生在质体中，乙
酰辅酶
A
催化第一步反应，随后在脂肪酸合成酶
(fatty acid syntheses, FAS)
的催化作用下进行碳链的
延长，酰基载体蛋白
(acyl-carried proteins, ACP)
与生
成的碳链结合，保护新生成的碳链免受其他多种酶
的侵蚀。以每次反应增加两个碳的方向合成酰基碳
链，最后在酰基
-ACP
硫酯酶
(acyl-ACP thioesterase,
FAT)
的作用下分离得到游离脂肪酸和载体蛋白
ACP (Dehesh et al.,1996)
。
植物中编码酰基
-ACP
硫酯酶
(FAT)
的基因通常
分为
fatA
和
fatB
两类
(
元冬娟等
, 2009)
。
fatA
主要编码
18:1-ACP
硫酯酶，
18:1-ACP
硫酯酶是一类重要的
“
持家
”
酶类，在大多数植物中，
FatA
具有很强的
18:1-ACP
催化活性
(Aubrey Jones et al., 1995)
。
fatB
主要编码生成饱和脂酰碳链的硫酯酶，也有一部分
编码生成非饱和脂酰碳链的硫酯酶。在大多数植物
中，
FatB
是一类具有
16:0-ACP
特性的硫酯酶，催化