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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1305
-
1311
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1305
-
1311
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1309
表
3
不定芽增殖培养
Table 3 Proliferation of adventitious buds
处理
NAA (mg/L) 6
-
BA (mg/L)
接种芽数
增殖频率
(%)
平均芽长
(
厘米
)
芽基部是否有愈伤组织
Treatment
No. of the buds Frequency of
proliferation (%)
Mean of adventitious
buds (cm)
Callus on the base of the
adventitious buds (Yes or No)
1
0.1
0.5
50
110
5.1
少量愈伤组织
Yes
2
0.1
1
50
168
4.9
少量愈伤组织
Yes
3
0.1
1.5
50
213
4.7
少量愈伤组织
,
褐化
Yes, and browning of callus
4
0.5
1
50
312
5
少量愈伤组织
,
褐化
Yes, and browning of callus
5
0.5
1.5
50
298
4.8
少量愈伤组织
,
褐化
Yes, and browning of callus
6
0.5
2
50
350
4.5
少量愈伤组织
,
褐化
Yes, and browning of callus
7
0.5
0.5
50
556
5.7
少量愈伤组织
,
褐化
Yes, and browning of callus
8
1
0.5
50
287
4.8
少量愈伤组织
,
褐化
Yes, and browning of callus
9
1.5
0.5
50
125
4.9
较多愈伤组织
Yes, and much more
注
:
增殖频率
=
增殖后芽数
/
接种芽数×
100%
Note: Frequency of proliferation equals to percentage of that numbers of proliferated buds divide by numbers of buds
高频而有效的再生体系；第三，为后期利用悬浮细
胞培养生产有用此生代谢产物奠定基础，例如从悬
浮细胞提取迷迭香酸是目前的研究热点
(Pavlov et
al., 2000; 2005; Georgiev et al., 2006; 2009; Kovacheva
et al., 2006)
。
前人有报道建立薰衣草的高频再生体系，但本
研究发现，在判断培养基对培养材料的目标产物是
否高效和有效时，除单纯地用诱导率、再生频率、
增殖频率、生根率以及高频再生体系等描述是不准
确和全面的。因为，如果诱导出来的愈伤组织不能
高效分泌有用次生代谢产物，或者不能有效地再分
化为不定芽，仅一味地追求高诱导率和再生频率是
不科学的。同理，尽管有时生根率较高，但在根和
芽之间形成了阻碍维管束连通的愈伤组织，则移栽
难以成活，这样的根也是无效根。因此在植物离体再
生体系建立时，单凭“诱导率”、“再生率”、“生根率”
和“高频再生体系”等不足以全面描述培养基条件的
适合度，还应综合考虑培养材料的生长状况。
本研究发现，维拉薰衣草不定芽在培养基中培
养时间较长时，培养基中有蓝色分泌物出现，使原
本无色的培养基变成蓝色
(
图
2 A)
，该物质是什么、
为何会产生以及有何用途有待进一步研究。
3
材料与方法
3.1
实验材料
维拉薰衣草
(
L. vera
)
幼嫩叶片，由刘雅婷教授
引种至云南农业大学农学与生物技术学院温室栽
培；基本培养基为
MS (Murashige and Skoog, 1962)
固化培养基，每升添加蔗糖
30 g
、琼脂
7 g
，
pH
为
5.8
，添加不同浓度植物生长调节剂
(NAA, KT, 6
-
BA)
；
培养基于
0.1~0.15 kPa
气压下，
121
℃灭菌
20 min
备用；无菌水
(
自来水高温高压灭菌
)
，
75%
乙醇，
0.15%
升汞。
3.2
维拉薰衣草
(
L. vera
)
叶片愈伤组织诱导
挑选生长健壮无病害的薰衣草嫩枝
4 cm
左右，
用自来水流水冲洗
0.5~1 h
，用
75%
乙醇灭菌
40 S
，
用
0.15%
升汞灭菌
5~7 min
，再用无菌水冲洗
3~5
遍，于灭菌的培养皿
(
垫无菌滤纸
)
将嫩叶切成
0.5~0.8 cm
大小的叶盘接种，培养。温度
(23
±
2)
℃，
相对湿度
75~85%
，光照强度
2 500 L x
，光照
/
黑暗
时间为
12 h/12 h
。从
5~7 d
开始观察并统计污染率
和是否启动愈伤组织脱分化，后每隔
10 d
左右观察