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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1235
-
1245
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1235
-
1245
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1238
hindsii
L.
×
Juglans regia
L.)
的体细胞胚中，对比转
化系与为转化系的各项表型特征
(
包括生根潜力
)
，
以普通核桃为砧木嫁接获得转化系和未转化系，剪
取插条经
K-IBA
处理，观察发现二者生长高度相
同，但冠层明显不同，转化系上层生长浓密且叶片
稍微卷曲，枝条节间长度变短，节点和侧枝数目增
加，春季枝条伸长和秋季进入落叶期推迟；另一组
试验中，以“
Chandler
”为接穗嫁接到转化系和未
转化系的砧木上，二者对接穗均无明显影响，但二
者根的形态特征明显不同，存在转化系砧木直径超
过
15 cm
的须根数量相对较少，进一步测定发现，
转化系根数量明显多于未转化系，但干重低于未转
化系，这说明转化系作为砧木促进生根，但对接穗
的表型无明显影响。
3
核桃遗传再生体系的建立
植株再生体系的建立是进行基因遗传转化的
前提和基础。目前植物界常用的转基因再生的组培
系统为：
(1)
原生质体再生，用于直接
DNA
转化和
农杆菌介导转化；
(2)
叶、茎外植体再生，只适合于
农杆菌介导转化。但是，迄今为止，还没有原生质体
再生培养的成功报道，而叶圆片再生已经有成功案例
(
表
1)
。刘淑兰和韩碧文以叶片、茎尖和叶柄为外植
体
(
刘淑兰和韩碧文
, 1984,
植物生理学通讯
, 4: 38)
，
诱导愈伤组织的形成，诱导培养基为
WPM+10 mg/L
BA+4 mg/L NAA+2 mg/L
，但没有获得完整植株。
Roschke
和
Pijut
首次以黑核桃叶片为外植体
(Roschke C., and Pijut P.M., 2006, http://www.
agriculture.purdue.edu/fnr/htirc/pdf/posters/Christian.
pdf)
，利用筛选出最佳诱导培养基
1/2DKW+
1/2WPM+0.2 mg/L IBA+1.5 mg/L TDZ
，暗培养
3
周
后转接，分化培养基
1/2DKW+1/2WPM+2.0 mg/L
BA+0.001 mg/L IBA+0.000 5 mg/L BS
，光照下培养
5
周后，成功实现植株再生。邢瑞丹等
(2010)
以“香
玲”核桃叶片外植体，筛选离体叶片的最适分化和
生根培养基，分别为
MS+0.5 mg/L BA+0.5 mg/L
NAA+1.0 mg/L TDZ
，
1/2DKW +5.0 mg/L IBA
，同
时优化离体再生条件。
核桃的体胚由于具有完整的两极结构，次生胚
能反复再生形成胚无性系，这种体胚发生是核桃转
基因研究良好的离体培养再生系统
(
表
2)
。
Tulecke
和
McGranahan (1985)
首次以函兹核桃
(
Juglans
hindsii
)
的未成熟子叶为外植体进行次生胚的增殖，
实现了体胚的再生。
Yates (1990)
通过研究不同的激
素水平下不同核桃品种的体胚再生，发现不同的品
种间胚性细胞的感知能力存在差异性。
Rodriguez
和
Wetzstein (1994)
的研究表明，不同类型和浓度的
生长素对体胚的形态及转化为植株的比例存在差
异，在促进愈伤组织的增殖方面萘乙酸不如
2,4
-
D
，
但其有利于类似合子胚结构的形成和球状胚向植
株的转化，而
2,4
-
D
在体胚的增殖方面效果较好。
表
1
核桃叶片愈伤报道一览表
Table 1 The list of published reports that achieved callogenesis from the walnut leaves (
Jugans spp
.)
种名
外植体
诱导培养基
*
分化培养基
参考文献
Species/
cultivar
Explant Inductive medium
Differential medium
References
核桃
J.
regia
叶片
Leaves
WPM+44.4BA+21.4NAA+5.8GA3 /
刘淑兰和韩碧文
, 1984,
植物生理
学通讯
, 4: 38
黑核桃
J.
nigra
叶片
Leaves
DW+1.0IBA+6.8TDZ
DW+8.8BA+0.005IBA+0.001BS;
DW+0.001BS; DW+0.005BS;
DW+0.005IBA+1.5TDZ+0.005BS;
DW+0.005IBA+1.5TDZ+0.001BS
Roschke C., and Pijut P.M., 2006,
http://www.agriculture.purdue.edu/
fnr/htirc/pdf/posters/Christian.pdf
核桃
J.
regia
叶片
Leaves
DKW+8.8BA+21.4NAA;
MS+8.8BA+21.4NAA;
WPM+8.8BA+21.4NAA;
BTM+8.8BA+21.4NAA
/
Avilés et al., 2009
核桃
J.
regia
叶片
Leaves
MS+2.2BA+2.7NAA+4.5TDZ
MS+2.2BA+2.7NAA+4.5TDZ
邢瑞丹等
, 2010
注
: *:
植物激素浓度单位
μmol/L
Note: *: The unit of plant hormone concerntration μmol/L