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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1115
-
1121
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1115
-
1121
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1118
不同种和品种的多态性丰富；通过遗传相似系数和
聚类分析，不同种和品种之间存在遗传差异。基于
SRAP
标记的聚类结果与基于形态特征的传统分类
结果是基本相符的。
Rinehart
等运用
SSR
对绣球属
植物进行遗传分析，不同种之间的差异
64.7%
(Rinehart et al, 2006)
，低于本项研究中的多态性比
率
98.7%
，可见
SRAP
提供了更丰富的遗传信息，
可以获得更可靠的结果。因此，在形态学研究的基
础上，
SRAP
标记不仅能用于遗传多样性分析，还
可用于新品种的鉴定和系统进化方面的研究。
八仙花栽培变种
H. macrophylla
var. Coerulea
与其它
7
个八仙花栽培品种的遗传相似系数在
0.298 7~0.34 8
之间，表明它们之间亲缘关系较远。
聚类分析结果发现，八仙花栽培变种
H. macrophylla
var. Coerulea
聚在第Ⅲ类群，属于蜡莲系，与其它
8
份材料的遗传相似系数在
0.486 8~0.554 2
之间，从
花部形态特征观察，八仙花栽培变种
H. macrophylla
var. Coerulea
为伞房状聚伞花序；花二型；放射花萼
4
片，菱状卵形，先端渐尖，全缘；孕性花小；与
该类的野生种具有一定的相似性，说明它们之间的
亲缘关系比较近，由此推论该栽培品种可能是蜡莲
系某一种的变异，但八仙花栽培变种
H. macrophylla
var. Coerulea
的遗传起源还有待进一步验证。
绣球属植物资源丰富，种间杂种的鉴别需在比
较形态学特征的基础上，借助
SRAP
分子标记方能
获得更可靠的结果，因此，该分子标记适用于种间
遗传关系的分析。
3
材料与方法
3.1
材料
19
份绣球属植物材料，分别引自湖南、杭州、
河北，于
2007
年成功移栽至湖南农业大学教学花
卉基地，详见表
2
。
3.2
方法
3.2.1
总
DNA
的提取
选取各种材料幼嫩叶片
5 g
，按
Murray
和
Thompson
的
CTAB
法
(Murry and Thompon, 1980)
进行
DNA
提取。用紫外分光光度计检验
DNA
质量，
并结合
1%
琼脂糖凝胶电泳检测其完整性，最终将
DNA
稀释为
50 ng/μL
，在-
20
℃保存。
3.2.2 SRAP-PCR
反应体系
通过单因子分析法，确定绣球属最佳反应体
系体积为
25 μL
：
10
×
PCR Buffer 2.5 μL
，
DNA
模
板量
30 ng
，
dNTPs
浓度
0.6 mmol/L
，
Mg
2+
浓度
1.6 mmol/L
、引物浓度为
0.2 μmol/L
，
Taq
聚合酶量
3.5 U
。扩增反应在
PTCl00 PCR
仪上完成，扩增程
序：
94
℃下预变性
4 min
，
94
℃下变性
1 min
，
35
℃
下退火
1 min
，
72
℃下延伸
2 min
，循环
5
次，在后
30
个循环中将退火温度将至
55.5
℃，最后
72
℃下
延伸
5 min
。扩增产物在含有
EB
的
2%
琼脂糖凝
胶电泳分离，银染观察和评价。采用
Li
等
(2009)
发
表的引物，包括
10
条正向引物，
11
条反向引物
(
见
表
3)
，
110
对引物组合。
3.2.3
数据统计
试验中条带统计软件为
Cross-Cherker
指纹图
谱分析软件，采用人工辅助读带，有扩增条带记为
1
，条带不清晰或无带记为
0
。聚类分析利用
NTSYS-pc 2.1
软件，采用
DICE
相似系数、非加权
组 平 均 法
(Unweighted Pairgroup Method and
Arithetic Average, UPGMA)
进行聚类，并绘出聚类
分析树状图。
作者贡献
陈海霞和彭尽晖是本研究的实验设计和实验研究的执
行人；陈海霞完成数据分析、实验设计和试验结果分析；彭
尽晖是项目的构思者和负责人，指导实验设计，数据分析，
论文写作与修改。全体作者都阅读并同意最终的文本。
致谢
本研究由湖南省科技厅重点项目
(2010NK2007)
资助。
作者感谢已毕业研究生李艳香同学在本实验过程中的帮助。
感谢两位匿名的同行评审人的评审建议和修改建议。
参考文献
Crespel L., Morel P., and Galopin G., 2012, Architectural and
genetic characterization of
Hydrangea aspera
subsp.
aspera
Kawakami group,
H. aspera
subsp.
sargentiana
and their hybrids, Euphytica (Published online), 184(3):
289-299 (http://rd.springer.com/article/10.1007/s10681-
011-0477-z#) http://dx.doi.org/10.1007/s10681-011-0477-z
Gerbah M., Mortreau E., Brown S C., Siljak-Yakovlev S.,
Bertrand H., and Lambert C., 2001, Genome size variation
and species relationships in the genus
Hydrangea
, Theor.
Appl. Genet., 103(1): 45-51 http://dx.doi.org/10.1007/
s001220000529
Huang L., Huang X.Y., He P., Du J., and Yuan X.F., 2001,
Taxonomic studies on the genus
Hydrangea
in Sichuan
and Chongqing (
Ⅰ
)
－
Its taxonomic history and geographic
distribution, Xi’nan Shifan Daxue Xuebao (Journal of