分子植物育种
            
            
              (
            
            
              网络版
            
            
              ), 2012
            
            
              年
            
            
              ,
            
            
              第
            
            
              10
            
            
              卷
            
            
              ,
            
            
              第
            
            
              1115
            
            
              -
            
            
              1121
            
            
              页
            
            
              Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1115
            
            
              -
            
            
              1121
            
            
              http://mpb.5th.sophiapublisher.com
            
            
              1116
            
            
              树系和腊莲系
            
            
              (
            
            
              卫兆芬
            
            
              , 1994)
            
            
              。在绣球属检索数据库
            
            
              中,多达
            
            
              35
            
            
              种形态学特征用于物种鉴别,但是很
            
            
              难对未知来源的种间杂种进行鉴定和命名,因此,
            
            
              在形态学鉴别的基础上进行分子辅助标记是很重
            
            
              要的手段。
            
            
              相关序列扩增多态性
            
            
              (sequence-related amplified
            
            
              polymorphism, SRAP)
            
            
              是一种近年来发展起来的新
            
            
              型标记系统,针对基因的开放阅读框
            
            
              (ORFs)
            
            
              设计特
            
            
              殊引物进行
            
            
              PCR
            
            
              扩增的标记技术
            
            
              (Li and Quiros,
            
            
              2001)
            
            
              ,广泛用于目的性状标记、遗传多样性分析及
            
            
              构建遗传图谱等研究领域
            
            
              (
            
            
              李严和张春庆
            
            
              , 2005;
            
            
              王
            
            
              长林等
            
            
              , 2005;
            
            
              文雁成等
            
            
              , 2006;
            
            
              张飞等
            
            
              , 2010;
            
            
              林忠
            
            
              旭等
            
            
              , 2004;
            
            
              李梅等
            
            
              , 2009)
            
            
              。
            
            
              近年来,在绣球属植物种质资源调查、保存
            
            
              和鉴定方面取得一些成绩。在比较形态学特征的
            
            
              基础上,对染色体核型进行分析更有利用种质资
            
            
              源的鉴定和利用
            
            
              (Gerbah et al, 2001; Van et al, 2007;
            
            
              Mortreau et al, 2010)
            
            
              。随着分子标记技术的发展,
            
            
              Mortreau
            
            
              和
            
            
              Crespel
            
            
              等运用
            
            
              ISSR
            
            
              标记了八仙花、马
            
            
              桑绣球及其杂交后代
            
            
              (Mortreau et al, 2003; Crespel
            
            
              et al, 2011)
            
            
              ;通过运用
            
            
              SSR
            
            
              标记技术分析部分绣球
            
            
              属植物资源的遗传特性,认为在形态学分类基础上
            
            
              进行分子标记能更准确地鉴定绣球属中的新种质
            
            
              (Rinehart et al, 2005; 2006; Rinehart and Reed, 2006)
            
            
              ;
            
            
              Joung
            
            
              等运用
            
            
              RAPD
            
            
              和
            
            
              SNP
            
            
              对韩国的野生绣球科植
            
            
              物进行标记,综合
            
            
              RAPD
            
            
              标记、
            
            
              SNPs
            
            
              和顶芽的特
            
            
              征鉴定出未知的野生资源
            
            
              (Joung et al, 2010)
            
            
              ;利用
            
            
              SSR
            
            
              标记
            
            
              114
            
            
              个八仙花品种,结果表明八仙花的杂
            
            
              色、重瓣花和四季开花特性具有遗传相似性
            
            
              (Reed
            
            
              and Rinehart, 2007)
            
            
              ;运用
            
            
              SSR
            
            
              标记
            
            
              36
            
            
              个圆锥绣球
            
            
              品种,鉴定了一个来源于日本的新基因型以及早花
            
            
              特性基因
            
            
              (Reed and Rinehart, 2009)
            
            
              。
            
            
              SRAP
            
            
              分子技
            
            
              术仅在绣球属植物八仙花上有报道
            
            
              (
            
            
              李艳香等
            
            
              ,
            
            
              2008)
            
            
              ,该标记技术的引物没有物种特异性,尤其
            
            
              适用于末知序列物种的标记,不但适合种内也适合
            
            
              于种间的研究。
            
            
              我国是绣球属植物的分布中心之一,仅利用形
            
            
              态学特征为依据进行野生资源的收集和利用研究局
            
            
              限性很大。因此,为更好的开发我国丰富的绣球属
            
            
              野生资源,本研究采用
            
            
              SRAP
            
            
              分子标记技术对
            
            
              19
            
            
              份
            
            
              绣球属种质资源进行聚类分析,研究绣球属植物之
            
            
              间的亲缘关系,旨在为绣球属分类、起源、品种选
            
            
              育、栽培应用和新优观赏特性挖掘利用等提供支持。
            
            
              1
            
            
              结果与分析
            
            
              1.1
            
            
              绣球属
            
            
              SRAP
            
            
              引物扩增多态性分析
            
            
              在
            
            
              110
            
            
              对引物组合中,
            
            
              14
            
            
              对适合绣球属植物,
            
            
              在种间扩增均有多态性,条带清晰,重复性好
            
            
              (
            
            
              见
            
            
              图
            
            
              1)
            
            
              。用筛选出来的
            
            
              14
            
            
              对引物组合扩增绣球属
            
            
              19
            
            
              个材料,获得
            
            
              235
            
            
              条带,其中
            
            
              232
            
            
              条为多态性带,
            
            
              多态性比率为
            
            
              98.7%
            
            
              ,每个引物组合扩增条带为
            
            
              14~20
            
            
              条,平均为
            
            
              16.6
            
            
              条,其中条带最多的组合为
            
            
              Me1Em3
            
            
              ,扩增出
            
            
              20
            
            
              个条带,其中
            
            
              19
            
            
              个多态性条
            
            
              带,表
            
            
              1
            
            
              列出了所选引物以及每对引物所扩增出的
            
            
              多态性条带数。
            
            
              图
            
            
              1
            
            
              引物组合
            
            
              Me1Em1
            
            
              对
            
            
              19
            
            
              份绣球属植物的扩增结果
            
            
              注
            
            
              : 1
            
            
              -
            
            
              11:
            
            
              绣球属野生种
            
            
              ; 12
            
            
              -
            
            
              19:
            
            
              八仙花品种
            
            
              Figure1 SRAP-PCR amplification profiles of 19 species of
            
            
              Hydrangea
            
            
              with primer combination Me1Em1
            
            
              Note: 1
            
            
              -
            
            
              11: Wild species of
            
            
              Hydrangea
            
            
              ; 12
            
            
              -
            
            
              19: Cultivars of
            
            
              H.
            
            
              macrophylla
            
            
              1.2
            
            
              绣球属
            
            
              SRAP
            
            
              遗传相似性分析
            
            
              19
            
            
              份绣球属植物之间的遗传相似系数变化范
            
            
              围在
            
            
              0.229 0~0.923 1
            
            
              之间,这说明
            
            
              19
            
            
              份材料遗传
            
            
              变化很大。在
            
            
              8
            
            
              个八仙花栽培品种中,‘
            
            
              Adria
            
            
              ’与
            
            
              ‘
            
            
              Lavbla
            
            
              ’遗传距离最近,相似性系数达
            
            
              0.923 1
            
            
              ,
            
            
              其次是栽培品种‘
            
            
              Adria
            
            
              ’和八仙花之间;然而,栽
            
            
              培变种
            
            
              H. macrophylla
            
            
              var. Coerulea
            
            
              与其它
            
            
              7
            
            
              个八仙
            
            
              花品种之间的遗传相似系数仅在
            
            
              0.298 7~0.341 8
            
            
              之
            
            
              间;从花部形态特征看,栽培变种
            
            
              H. macrophylla
            
            
              var.
            
            
              Coerulea
            
            
              中心部分为可育花,外围雄蕊瓣化,而其
            
            
              它
            
            
              7
            
            
              个品种雄蕊全部瓣化。相似性系数最低的是伞
            
            
              形绣球和白背绣球之间,仅为
            
            
              0.229 0
            
            
              ;其次为伞形
            
            
              绣球与八仙花栽培变种
            
            
              H. macrophylla
            
            
              var. Coerulea
            
            
              。
            
            
              卫兆芬分类结果显示,伞形绣球被划分在绣球组绣
            
            
              球花系内,而白背绣球属挂苦树系。这些相似性系
            
            
              数较为真实地反映了各类群间的亲缘关系。
            
            
              1.3
            
            
              绣球属
            
            
              UPGMA
            
            
              聚类分析
            
            
              19
            
            
              份绣球属植物
            
            
              UPGMA
            
            
              聚类分析结果如图
            
            
              2
            
            
              所示。以遗传系数
            
            
              0.43
            
            
              为阀值,将
            
            
              19
            
            
              份绣球属植