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王爱香等
, 2011,
火鹤
胚状体诱导与发生过程中愈伤组织细胞学观察
,
分子植物育种
(online) Vol.9 No.97 pp.1700-1705 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0097))
1704
胞的增殖、膨胀使
EC
崩溃，崩溃后分生性的表面细
胞结合成群，又形成新的
EC
。
EC
在转入降低或去
除生长素、降低还原氮的培养基后，完成胚状体的
发育
(Steward et al., 1964)
。何业华观察到菠萝愈伤
组织的内部和表面都有体细胞胚的发生，在同一个
视野可以观察到多个体细胞胚发生中心，体细胞胚
发生表现出不均匀、不同步，有些胚状体还形成了
次生胚
(
何业华等
, 2010)
。本研究也观察到花烛胚性
愈伤组织有多个发育不同步的体细胞分化中心
(
图
3
-
E)
，甚至在一些胚状体表面又形成新的体细胞分
化中心
(
胚胎发生丛
) (
图
3
-
D,
图
3
-
I)
，成为次生胚发
生的来源。
由上述研究可见，较高浓度
2,4
-
D
诱导获得的
火鹤初代愈伤组织并没有体细胞原胚的发生；但是
继代获得的新的愈伤组织观察到了大量的发育不
同步的体细胞原胚发生。这与赵云鹏以较低浓度的
2,4
-
D 0.1 mg/L
诱导最后获得大量不定芽及少量体
细胞原胚有明显不同
(
赵云鹏等
, 2005)
。但是，生
产上要想获得整齐的胚状体种苗，还需要在我们研
究的基础上，进行液体悬浮培养、低温处理等措施
进行体细胞胚发生同步化控制的研究
(
张宇和沈海
龙
, 2007)
。
3
材料与方法
3.1
实验材料
火鹤盆栽品种“阿拉巴玛”
(Anthurium andr-
aeanum
‘
Alabama
’
)
购自于北京五洲翔远农业发展
有限公司，以盆栽方式种植于温室中。
3.2
实验方法
3.2.1
愈伤组织的诱导与继代培养
取刚展开的幼嫩叶片为外植体材料，经过
0.1%
升汞
3 min
表面灭菌后，用无菌水冲洗
4~5
遍，
将叶片沿中脉切成
1
×
1 cm
叶片切块平铺接种于
(
表
1)
所示的不同培养基中，培养基
PH
值为
5.8
，每
种培养基接种
10
瓶，每瓶
3
块叶片，于
(25
±
2)
℃黑
暗条件下诱导愈伤组织。两个月后待粒状愈伤组织
连成片后，将愈伤组织切割置于
1/2MS+1.0 mg/L
6
-
BA+0.1 mg/L KT+0.5 mg/L NAA
上继代培养。
3.2.2
愈伤组织的细胞学观察
分别取“阿拉巴玛”叶片在加有
2,4
-
D
的培养
基上诱导产生的愈伤组织、以及上述愈伤组织分割
成小块后在未加
2,4
-
D
的继代培养基上新产生的愈
伤组织为材料，切成小块，用
FAA
固定液固定
24 h
，
采用常规石蜡切片法切片，切片厚度
8 μm
，用番红
固绿染色法染色，中性树胶封片，在光学显微镜下
观察并拍照。
作者贡献
王爱香和彭娇是本研究的实验设计和实验研究的执行
人；王爱香完成数据分析，论文初稿的写作；贾月慧参与实
验设计，试验结果分析；张克中是项目的构思者及负责人，
指导实验设计，数据分析，论文写作与修改。全体作者都阅
读并同意最终的文本。
致谢
本研究由北京市教委科技创新平台
(PXM2009
-
014207
-
078529)
和北京市科技新星项目
(2003B013)
共同资助。作者感
谢北京农学院洪培培硕士在本实验过程中的技术帮助和有益
的建议。
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