(
付蓉蓉等
, 2011,
番茄黄化
曲叶病的
Ty
-
1
和
Ty
-
3
抗性基因的
PCR
鉴定
,
分子植物育种
(online) Vol.9 No.91 pp.1647-1653 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0091))
1648
重的损失
(
何自福等
, 2005;
岳宁等
, 2008;
王东生等
,
2006,
长江蔬菜
, 10: 25-26;
吴永汉等
, 2007,
中国蔬
菜
, 5: 57-58;
赵统敏等
, 2007;
赵统敏等
, 2008,
江苏
农业科学
, 6: 114-115)
,近几年已扩展至北京,天津,
河北等北方地区。但不同地区的番茄黄化曲叶病毒
变异较大,使得番茄黄化曲叶病抗病育种进展缓慢,
而抗病性鉴定是抗病育种的重要基础,从抗源筛
选、后代选择、直到品种推广的全过程都离不开抗
病性鉴定。但
TYLCV
不能通过人工摩擦接种和机械
传毒,所以传统抗病性鉴定方法为,利用带毒烟粉
虱进行接种,然后调查植株的症状,但这会受到植
株及烟粉虱的生长条件、气候、土壤等外界环境的
影响,且工作量较大。运用分子标记进行辅助育种
可避免复杂的抗性鉴定步骤,迅速检测抗病基因,
筛选抗性植株,加快育种进程。本文主要研究番茄
黄化曲叶病分子标记抗病性鉴定体系的建立,并通
过田间自然发病的方法进行验证,以确定番茄所含
的番茄黄化曲叶病抗性基因对其抗性的影响,以期
为中国番茄黄化曲叶抗病育种工作提供一些信息。
1
结果与分析
1.1
Ty
-
1
抗性基因检测结果
以与
Ty
-
1
抗性基因紧密连锁的
CAPS1
标记为引
物的扩增结果表明
(
图
1;
图
2)
,所有基因型的植株
都扩增出
398 bp
的特异片段,但
Ty
-
1
基因的
398 bp
特异片段经
Taq
Ⅰ酶切后为
303 bp
和
98 bp
的特异片
段,
ty
-
1
基因的
398 bp
的特异片段不能被
Taq
Ⅰ酶切。
所以材料
1
,
2
,
3
,
5
,
9
,
10
的基因型为
Ty
-
1
/
ty
-
1
;
材料
4
,
7
,
8
的基因型为
Ty
-
1
/
Ty
-
1
;材料
6
,
7
,
8
的
基因型为
ty
-
1
/
ty
-
1
。
1.2
Ty
-
2
抗性基因检测结果
以与
Ty
-
2
抗性基因紧密连锁的
SCAR2
标记为
图
1
Ty
-
1
基因的
CAPS
引物扩增结果
注
: M: DL1000 DNA
标记
; 1~12:
材料编号
Figure 1 The amplification of
Ty
-
1
gene using CAPS1 primer
Note: M: DL1000 DNA marker; 1~12: Materials number
图
2
Ty
-
1
基因的
CAPS1
引物扩增后经
TAQI
酶切结果
注
: M: DL1000 DNA
标记
; 1~12:
材料编号
Figure 2 The amplification of
Ty
-
1
gene using CAPS1 primer
with TAQI Digestion
Note: M: DL1000 DNA marker; 1~12: Materials number
引物扩增结果表明
(
图
3)
,所有材料均没有出现
Ty
-
2
基因
900 bp
的特异片段,仅扩增出
ty
-
2
基因的
800 bp
的特异片段,表明本所有鉴定材料均不含
Ty
-
2
抗性基因。
图
3
Ty
-
2
基因的
SCAR2
引物扩增结果
注
: M: DL1000 DNA
标记
; 1~12:
材料编号
Figure 3 The amplification fragments of
Ty
-
2
gene using
SCAR2 primer
Note: M: DL1000 DNA marker; 1~22: Materials number
1.3
Ty
-
3
抗性基因检测结果
以与
Ty
-
3
紧密连锁的
SCAR3
标记为引物的扩
增结果表明,
Ty
-
3
基因仅扩增出
650 bp
的特异片段,
ty
-
3
基因仅扩增出的
320 bp
的特异片段
(
图
4)
。所以
材料
1
,
2
,
4
,
7
,
8
的基因型为
Ty
-
3
/
Ty
-
3
,材料
3
,
5
,
9
,
10
的基因型为
Ty
-
3
/
ty
-
3
,材料
6
,
11
,
12
的基
因型为
ty
-
3
/
ty
-
3
。
图
4
Ty
-
3
基因的
SCAR3
引物扩增结果
注
: M: DL1000 DNA
标记
; 1~12:
材料编号
Figure 4 The amplification of
Ty
-
3
gene using SCAR3 primer
Note: M: DL1000 DNA marker; 1~12: Materials number