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岳晋军等
, 2011,
毛竹种胚愈伤组织诱导及分化的初步研究
,
分子植物育种
Vol.9 No.57 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0057)
1429
的条件探索，本研究的愈伤组织诱导率叫文献报道
中的高。
吴益民通过综述竹类植物组织培养的文献资
料，提出了竹子的愈伤组织分为非胚性愈伤组织、
致密性胚性愈伤组织和粘性愈伤组织三种类型。阙
国宁在黄竹和印度莿竹的组织培养中只观察到两
种类型的愈伤组织，一种是胚性愈伤组织，特征是
深黄色、质地紧密，具瘤状结构，另外一种是非胚
性愈伤组织，质地疏松、乳白色、继代培养后增殖
速递加快
(
吴益民
, 2000)
。
丁莉萍在小麦成熟胚的研究中将愈伤组织分
为两种类型，来源于胚轴的愈伤组织，致密淡黄色，
具有较强的再生能力，来源于胚根的愈伤组织多数
是白色或灰色，水渍状，基本上没有分化能力
(
阙国
宁
, 1994)
。在实验过程中观察到的现象和丁莉萍所
描述的愈伤组织起源部位和状态情况基本一致，结
合阙国宁的描述，将愈伤组织分为两种类型，一类
是来源于胚根和胚芽结合部位，其生长较为缓慢，
质地坚实，呈乳白色或黄色，表面光滑或具球形颗
粒状
(
图
1C)
，而起源于胚根部位的愈伤组织多数为
生长迅速、疏松易碎的非胚性愈伤组织，白色、黄
色或褐色，表面粗糙
(
图
1D)
。尽管愈伤组织具有不
同状态，但在继代培养过程中，所有类型愈伤组织
都存在继代容易褐变，如果分化的话，都出现愈伤
组织死亡现象，没有任何分化迹象。所不同的是，
非胚性愈伤组织在培养过程中容易褐变，最终也留
下了部分能够长期继代的类型，随着继代时间的增
加，部分分化成粘性愈伤组织，多次继代后，在没
有任何激素的
MS
培养基上也能正常生长。
3
材料与方法
3.1
材料
毛竹种胚收集于广西地区等开花竹林，采后自
然晾干，保存于-
18
℃
条件下，需要时取出，除掉
外壳，挑选饱满成熟、色泽大小均匀的正常发育种
胚作为实验材料。
3.2
处理方法
先进行初步的预处理后，将种胚放在无菌水
浸泡
12 h
，
0.1% HgCl
2
消毒
10 min
，期间摇晃数次，
保证消毒彻底，无菌水冲洗至少
10
遍以上，以保
证没有
HgCl
2
毒害，在无菌纸上通过剥胚，沿腹缝
线横切，平行腹缝线纵切等
3
种不同方式进行处
理，按照盾片向上、盾片向下
2
种方式接种到培养
基上。按照
5
粒
/
皿进行接种，
10 d
时未污染的种胚
挑出，用相同配方进行继代，培养
30 d
时，进行
愈伤组织诱导率和愈伤组织质量的情况统计。统
计完后将所有愈伤组织均转接到无激素的培养基
上进行分化处理。
3.3
培养基
基本成分：
MS
大量
+B 5
微量
+B 5
有机
+MS
铁
盐
+30 g/L
蔗糖
+8.0 g/L
卡拉胶
+500 mg/L Proline
+300 mg/L Glutamine+500 mg/L Casamino Acids
，分
别附加
1.0
、
2.0
、
4.0
、
6.0
、
10.0 mg/L
等不同浓度梯
度的
2,4
-
D
形成
D1
、
D2
、
D3
、
D4
、
D5
系列培养基，
灭菌前
pH
用
KOH
调整到
5.80
，
121
℃
下灭菌
20 min
。
分化培养基为基本培养基，不附加任何激素用
D0
培养基，添加激素如表
3
中所示。
3.4
培养条件
将接种后的培养皿放置到黑暗处培养，温度
26
℃
。分化时接种后光照时间为
16 h
每天，光照强
度
3 000 lux
，温度
26
℃
的条件下培养。
3.5
观察与统计
30 d
时统计愈伤组织发生率和紧实愈伤组织
数。愈伤组织诱导率
=
诱导出愈伤组织的外植体数
/
无菌外植体数
×100%
，紧实愈伤组织诱导率
=
诱导
出紧实愈伤组织的外植体数
/
无菌外植体数
×100%
。
作者贡献
岳晋军，袁金玲是本研究的实验设计和实验研究的执行
人；岳晋军，袁金玲及郭广平完成数据分析，论文初稿的写
作；吴晓丽参与实验设计，试验结果分析；顾小平是项目的
构思者及负责人，指导实验设计，数据分析，论文写作与修
改。全体作者都阅读并同意最终的文本。
致谢
本研究由浙江省重大科技专项重点项目
(2009C12097)
和中国林科院亚热带林业研究所基本科研业务费
(RISF6908)
共同资助。
参考文献
Han W.J., Zhou H., and He G., 2004, Studies on browning in
callus culture of
phyllostachys heterocycla
var.
pubescens
,
Hunan Linye Keji (Journal of Hunan Forestry Science and