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江锡兵等
, 2011,
毛白杨基因组内转录区域遗传杂合水平估算
,
分子植物育种
Vol.9 No.55 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0055)
1416
50 (
种植于山东冠县全国毛白杨基因库
)
和毛新杨无
性系雌株
TB01 (
种植于中国农业大学校园内
)
。张德
强等
(2003)
于
2000
年通过人工水培杂交获得
694
株
种间回交子代，并将子代与亲本共同定植于北京林
业大学苗圃内。
2007
年
6
月，对该群体进行调查，
随机选择其中的
132
株进行遗传杂合度估算。
提 取 未 成 熟 木 质 部 组 织 的
RNA
作 为
cDNA-AFLP
分析的起始材料。参照
Sterky (2002)
的
方法并进行相关改进，对未成熟木质部进行取样。
具体方法如下：用解剖刀在树干胸径处向南一侧树
皮上
(
同一方向取样
)
切割出
5 cm
×
5 cm
大小的方
块，拨开树皮后木质部外的几层水状细胞即为未成
熟木质部组织，刮取、收集未成熟木质部组织并迅
速冻存至液氮中，带回北京林业大学实验室进行
RNA
提取工作。
3.2 RNA
提取
RNA
提取采用
RNessy Plant Mini Kit (Qiagen)
，
操作步骤参见试剂盒说明书，在提取过程中，加入
DNA
酶
(Qiagen)
完全清除残留的
DNA
，
50 μL
去离子
水洗脱后，取
2 μL
用
1%
琼脂糖凝胶电泳检测，其余
放入-
80
℃冰箱中待用。
3.3 cDNA
合成
对提取的总
RNA
进行电泳检测，选取质量较高
的总
RNA
进行
cDNA
合成，采用
Reverse Transcription
System (Promega)
合成
cDNA
第一链，具体操作方法
见试剂盒说明书；
cDNA
第二链的合成参照
Sambrook
等
(2002)
方法。
3.4 cDNA-AFLP
分析
cDNA-AFLP
操作参考
Bachem
等
(1998)
的方法，
内切酶为
Eco
R
Ⅰ和
Mse
Ⅰ。电泳条件为恒功率
95 w
，
6%
聚丙烯酰胺凝胶电泳
2 h
，硝酸银染色，碳酸钠
溶液显影后进行结果统计分析。
3.5
杂和水平分析
根据
Cervera
等
(2001)
研究方法，在子代中分离
的总标记数与所观察到的总标记数之比被定义为
平均遗传杂合水平。
作者贡献
江锡兵、李博、宋跃朋和王泽亮是本研究的实验设计和
实验研究的执行人；江锡兵及李博完成数据分析，论文初稿
的写作；宋跃朋、王泽亮和安新民参与实验设计，试验结果
分析；张志毅是项目的构思者及负责人，指导实验设计，数据
分析，论文写作与修改。全体作者都阅读并同意最终的文本。
致谢
本 研 究 由 国 家 林 业 公 益 性 科 研 专 项 经 费 项 目
(201004009)
资助，作者感谢张德强教授在本实验过程中的
技术支持和有益的建议。
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