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李跃飞等
, 2011,
大白菜桔红心基因
or
的
SSR
标记定位
,
分子植物育种
Vol.9 No.53(doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0053)
1399
由北京赛百盛公司合成。
3.3
桔红心性状遗传分析
配制杂交组合
Chiifu×07 A 163
，利用
120
株
F
1
代和用于
or
基因定位的
600
株
F
2
代群体进行桔红
心基因遗传特性的分析，在植株成熟期剖球，肉眼
调查
2
世代各单株心叶颜色。
3.4 DNA
提取和基因池的构建
提取方法采用
CTAB
法
(Murray and Thompson,
1980)
并略有改动，将提取的
DNA
调整至
50 ng /μ
待用。由于无法区分白心单株基因型，所以只选用
F
2
代桔红心单株构建了
3
个基因池，利用双亲和构
建的
3
个池进行
BSA (bulked segregant analysis)
分
析
(Michelmore et al., 1991)
。
3.5 PCR
扩增程序与产物检测
PCR
反应在
BIO-RAD
上进行，采用
10 μL
反
应体系：
25 ng
模板
DNA
，
0.8 μL 2.5 mM d NTP
，
1.2 μL 10×Buffer (
含
Mg
2+
)
，
1μL 0.5 μmol/L primer
，
1U
Taq
polymerase
。
PCR
反应程序为：
95
℃
预变性
5 min
、
95
℃
变性
30 s
、
57
℃
退火
30 s
、
72
℃
延伸
30 s
、
循环
30
次后，
72
℃
保温
5 min
。扩增产物置
4
℃
冰
箱贮藏备用，
6 %
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，聚丙
烯酰胺凝胶电泳在北京六一
DYCZ 220C
型电泳槽
上进行，预电泳
30 min
后上样
4 μL
，
60 W
恒功率
电泳
1 h
，银染显色。
3.6
连锁分析与
or
基因定位
根据分离条带基因型，用
Mapmaker/Exp 3.0
软
件
(Lander et al., 1987)
对
or
基因的遗传连锁关系进
行分析
(LOD=3.0)
并将其定位于相应的染色体上，
经
Kosambi
函数
(Kosambi, 1944)
换算成遗传距离。
作者贡献
冯辉和李跃飞是本研究的实验设计和实验研究的执行
人；李跃飞完成数据分析，论文初稿的写作；冯辉和刘志勇
及刘静参与实验设计，试验结果分析；冯辉是项目的构思者
及负责人，指导实验设计，数据分析，论文写作与修改。全
体作者都阅读并同意最终的文本。
致谢
本研究由国家
863
计划项目
(2006AA10Z170)
和教育部
高 等 学 校 博 士 学 科 点 专 项 科 研 基 金 资 助 课 题
(20092103110001)
共同资助。本文中提到了我们实验中涉及
的有关试剂供应商和测序服务商，这并非我们为这些试剂供
应商和测序服务商的产品和服务提供推荐或背书。
参考文献
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