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田玉娥等
, 2011,
小豆组织培养和植株再生研究
,
分子植物育种
Vol.9 No.35 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0035)
1270
图
1
不同小豆胚轴外植体芽分化频率
Figure 1 Frequency of shooting
initiation
from hypocotyls
explant in cultivated azuki bean
2
讨论
李凤玉等
(1999)
研究表明大豆子叶离体诱导
不定芽、不定根的发生和植株再生最适宜的苗
龄为
3 d
。金文林和蓬原雄三
(1993)
认为初生叶以出
芽后
2 d
苗龄的材料最好，而上胚轴、子叶、子叶
节、主根基部和根尖外植体以出芽后
3 d
苗龄的
愈伤组织分化诱导率较高。本研究表明发芽
5 d
的小豆无菌苗下胚轴芽分化频率最高，下胚轴的
再生能力比上胚轴强，芽分化频率达
82.5%
。因
此，在以小豆下胚轴为外植体进行再生试验时，
应选用苗龄
5 d
之内的无菌苗。
图
2
栽培小豆胚轴诱导的再生芽和植株
Figure 2 Regenerating Shoot and plant induced by hypocotyls in cultivated azuki bean
注
: A:
无菌苗
; B:
下胚轴直接诱导的丛生芽
; C:
上胚轴直接诱导的丛生芽
; D:
下胚轴再生小植株
Note: A: Sterile seedling; B: Shoot clumps induced by hypocotyls; C: Shoot clump induced by epicotyls; D: Small plants regenerated
by hypocotyls
6
-
BA
是最重要的植物激素，可促使分生组织分
裂并打破顶端优势促进不定芽的形成
(
龚学臣等
,
2005)
。本研究结果表明，
NAA
浓度较高时，造成
愈伤组织的大量生长，过度生长的愈伤组织抑制了
芽的生长，因此降低了芽分化率。适宜的
6
-
BA
浓度
可显著地促进丛生芽的形成，高浓度的
6
-
BA
对芽生
长有抑制作用，本试验中添加
2 mg/L 6
-
BA
的丛生
芽诱导率显著地高于其他浓度组合的诱导率。
同一品种的不同外植体，由于内源激素含量不
同，在同样培养基成分和培养条件下芽诱导率不
同。不同品种由于遗传及生理差异，由下胚轴诱导
芽再生的效果也不同
(Barwale et al., 1986)
。本实验
用
MS+2 mg/L 6
-
BA+3%
蔗糖为芽诱导培养基，对
6
个在栽培小豆下胚轴直接诱导再生芽的效果都比
较好，芽分化频率达到
25.3~82.5%
，
JN5
下胚轴丛
生芽诱导率
82.5%
，明显高于其他材料，初步认为
JN5
下胚轴是诱导丛生芽产生并再生植株的良好材
料。马晖玲等
(2004)
研究表明苜蓿不同品种间体细
胞胚胎发生能力表现出明显差异，紫花苜蓿品种下
胚轴均有较强的再生率。金文林和蓬原雄三
(1993)
选用
G-I
-
24
、
L-I
-
57
、
86
早
67
、蛭川小豆和蛭川大
纳言等
7
个栽培小豆进行外植体直接诱导，发现不
同品种再生能力存在很大差异，
L-I
-
57
上胚轴外植
体诱芽率最高，达
29.2%
。本研究认为下胚轴再生
能力较强，但不同小豆下胚轴的再生能力存在差
异。仍需要广泛筛选，找出再生能力强的小豆种质
进行遗传转化，并进一步确定最佳诱导苗龄、激素
种类和浓度，提高诱导率，缩短诱导时间，建立高
效的小豆再生体系。
3
材料和方法
3.1
材料
小豆
GM278
、
GM13
、京农
5
号、京农
6
号、京
农
8
号和吉红
9
号种子由北京农学院植物科学技术