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分子植物育种
(
网络版
), 2011
年
,
第
9
卷
,
第
1167
-
1172
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2011, Vol.9, 1167
-
1172
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
1167
研究报告
A Letter
金花茶
SRAP-PCR
反应体系的优化与确立
李健
1,2
,
蒋昌华
1,2
,
张亚利
1,2
,
刘炤
1,2
,
赵晓峰
1,2
,
胡永红
1,2
1.
上海植物园
,
上海
, 200231
2.
上海城市植物资源开发应用工程技术研究中心
,
上海
, 200231
通讯作者
: lijian19812008@126.com;
作者
分子植物育种
, 2011
年
,
第
9
卷
,
第
23
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0023
收稿日期：
2010
年
10
月
20
日
接受日期：
2011
年
02
月
18
日
发表日期：
2011
年
03
月
01
日
这是一篇采用
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,
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引用格式：
李健等
, 2011,
金花茶
SRAP-PCR
反应体系的优化与确立
,
分子植物育种
Vol.9 No.23 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0023)
摘
要
本研究采用
L
16
(4
5
)
正交实验设计
,
对
SRAP-PCR
反应体系中
Mg
2+
、
dNTPs
和引物浓度以及
Taq
DNA
聚合酶和模板
DNA
用量等
5
个因素进行了优化
,
并确立了适合金花茶
(
Camellia nitidissima
) SRAP-PCR
的反应体系。金花茶的
SRAP-PCR
最佳反应体系为
:
反应体系总体积
20 μL
，含
1.50 mmol/L Mg
2+
、
0.20 μmol/L dNTPs
、
0.30μmol/L
引物、
75 ng
模板
DNA
、
1.00
U
Taq
DNA
聚合酶及
1×PCR Buffer
。各因素对金花茶基因组
DNA SRAP-PCR
扩增结果的影响程度不同
,
其中
Mg
2+
浓度的影
响最大
,dNTPs
浓度的影响最小。通过对优化的
SRAP-PCR
反应体系进行验证
,
获得了多态性丰富、条带清晰的扩增图谱
,
表明
所确立的金花茶
SRAP-PCR
反应体系稳定可靠。
关键词
金花茶
; SRAP-PCR;
正交实验设计
;
反应体系优化
Optimization and Establishment of SRAP-PCR Reaction System of
Camellia
Nitidissima
Li Jian
1,2
, Jiang Changhua
1,2
, Zhang Yali
1,2
, Liu Zhao
1,2
, Zhao Xiaofeng
1,2
, Hu Yonghong
1,2
1. Shanghai Botanical Garden, Shanghai, 200231, P.R. China
2. Shanghai Engineering Research Center of Sustainable Plant Innovation, Shanghai, 200231, P.R. China
Corresponding author, lijian19812008@126.com;
Authors
Abstract
By the orthogonal experiment design L
16
(4
5
), five factors including Mg
2+
concentration, dNTPs concentration, primer
concentration,
Taq
DNA polymerase amount and template DNA amount in SRAP-PCR reaction system were optimized, and the
optimization SRAP-PCR reaction system suitable for genomic DNA from
Camellia nitidissima
were also established. The optimal
SRAP-PCR reaction system is as follows: total volume 20μL, containing 1.50 mmol/L Mg
2+
, 0.20 μmol/L dNTPs, 0.30 μmol/L
primer, 75 ng template DNA, 1.00 U
Taq
DNA polymerase and 1×PCR buffer. The effects of five factors on amplification result of
SRAP-PCR are different in which, the effect of Mg
2+
concentration is the greatest but that of dNTPs concentration is the least. The
optimal SRAP-PCR reaction system is identified and the amplification pattern with rich polymorphism and clear band is obtained. It
is concluded that this SRAP-PCR reaction system used for genomic DNA from
Camellia nitidissima
is steady and reliable.
Keywords
Camellia nitidissima
; SRAP-PCR; Orthogonal experiment design; Optimization of reaction system
研究背景
金花茶
(
Camellia nitidissima
Chi
)
是山茶科
(Theaceae)
山茶属金花茶组植物，为常绿灌木或小
乔木。作为国家一级保护植物和稀有物种金花茶已
列入中国植物红皮书
(
傅立国
, 1992)
和《国际生物多
样性公约》附属Ⅱ物种
(
黄付平
, 2001)
。金花茶花蜡
质金黄、金瓣玉蕊，它含有特殊的黄色遗传基因
KNA
在植物界十分罕见
,
填补了园艺学家梦寐以求
的黄色系列茶花的空白
(
秦小明等
, 2005)
。因此金花
茶是世界珍稀的观赏植物和种质资源
,
被人们誉为
“
茶族皇后
”
和植物界的
“
大熊猫
”
。
邓桂英等
(2000)
对金花茶的杂交育种、染色体
数目及核型分析、分类及其演化、孢粉学以及应用
研究等方面的最新进展作了总结概述。但是金花茶
的分子生物学研究相对滞后，目前已报道的应用于
金花茶的分子标记主要有
RAPD (
施苏华等
, 1998;