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关世凯等
, 2011,
甘薯近缘野生种
Ipomoea cordatotriloba
组织及原生质体培养植株再生
,
分子植物育种
(online) Vol.9 No.117 pp.1851-1856
(doi: 10.5376/ mpb.cn.2011.09.0117)
1855
养皿上切成
3~4 mm
长的小段，接种在添加
0.05 mg/L
2, 4-D
和
0.5 mg/L KT
的
MS
固体培养基上，在
27±1
℃下暗培养，诱导愈伤组织的形成。
培养
3~4
周后，将形成的愈伤组织转移到分别添
加
0
、
0.1 mg/L IAA
和
1.0 mg/L
、
2.0 mg/L
、
5.0 mg/L
BAP
的
6
种分化培养基上
(
表
1)
，在
27±1
℃、每日
13 h
、
3000 lux
光照下进行培养，以诱导不定器官
的分化。每种培养基上转移
50
个愈伤组织，
3
次重
复。转移
4~6
周后，将具有不定器官的愈伤组织进
一步转移到
MS
基本培养基上，在相同条件下培养，
诱导植株再生。用
SPSS 13.0
软件分析不同分化培
养基对植株再生的效果。
3.3
甘薯近缘野生种
I. cordatotriloba
叶柄原生质体
培养及植株再生
3.3.1
原生质体分离
根据
Liu
等
(1991)
的方法，从甘薯近缘野生种
I
.
cordatotriloba
离体培养植株的叶柄分离原生质体。
3.3.2
原生质体培养及愈伤组织形成
将
I
.
cordatotriloba
的原生质体悬浮培养在含
2.5 mL
培养基
P
1
的直径
60 mm
玻璃培养皿中，原
生质体的培养密度为
1~2×10
4
原生质体
/mL
。用
Parafilm
将培养皿密封，放在
2±l
℃的黑暗条件下，
采用液体浅层法进行静置培养。每隔
4
周，将培养
物依次转移到培养基
P
2
和
P
3
中，在相同条件下进
行培养，以诱导原生质体形成细胞团和愈伤组织。
培养
10~12
周后，将直径达
l~3 mm
的小愈伤
组织转移到添加
0.05 mg/L 2,4-D
和
0.5 mg/L KT
的
MS
固体培养基上进行培养，使愈伤组织增殖，培
养条件为
27±1
℃、黑暗。
3.3.3
植株再生
将增殖得到的愈伤组织转移到分别添加
2.0 mg/L
BAP
、
0.1 mg/L IAA
和
2.0 mg/L BAP
、
0.1 mg/L IAA
和
5.0 mg/L BAP
的
3
种分化培养基上，在
27±1
℃、
每日
13 h
、
3000 lux
光照下培养，诱导愈伤组织的
分化。在分化培养基上培养
4~6
周后，将愈伤组织
进一步转移到
MS
基本培养基上，在相同条件下培
养以诱导植株再生。用
SPSS 13.0
软件分析不同分
化培养基对原生质体植株再生的效果。
作者贡献
关世凯是本研究的实验设计和实验研究的执行人；杨育
峰和孙亚萍是本研究的实验设计和实验研究的执行人；翟红
和何绍贞参与实验设计，试验结果分析；刘庆昌是论文的构
思者及负责人，指导实验设计，数据分析，论文写作与修改。
全体作者都阅读并同意最终的文本。
致谢
本研究由国家甘薯产业技术体系
(CARS-11)
资助。
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