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关世凯等
, 2011,
甘薯近缘野生种
Ipomoea cordatotriloba
组织及原生质体培养植株再生
,
分子植物育种
(online) Vol.9 No.117 pp.1851-1856
(doi: 10.5376/ mpb.cn.2011.09.0117)
1853
表
1
不同分化培养基对
I
.
cordatotriloba
叶柄愈伤组织植株再生的影响
Table 1 Effects of different regeneration media on plant regeneration in petiole tissue cultures of
I
.
cordatotriloba
IAA
(mg/L)
BAP
(mg/L)
外植体数
No. of
explants (A)
形成愈伤
组织数
No. of
calluses (B)
愈伤组织形
成率
Frequency of
callus B/A(%)
再生植株愈伤
组织数
No. of callus
forming plants
(C)
再生植株
总数
No. of plants
formed (D)
再生率
Frequency of
regeneration
(C/B(%))
平均再生率
Average frequency
of regeneration
(%)
50
50
100
12
27
24.00
50
50
100
11
19
22.00
0
1.0
50
50
100
14
32
28.00
24.67 ± 3.06a
*
50
50
100
26
51
52.00
50
50
100
21
38
42.00
0
2.0
50
50
100
25
42
50.00
48.00 ± 5.29c
50
50
100
17
21
34.00
50
50
100
12
18
24.00
0
5.0
50
50
100
14
19
28.00
28.67 ± 5.03ab
50
50
100
11
19
22.00
50
50
100
11
21
22.00
0.1
1.0
50
50
100
12
21
24.00
22.67 ± 1.15a
50
50
100
18
28
36.00
50
50
100
20
33
40.00
0.1
2.0
50
50
100
15
22
30.00
35.33 ± 5.03b
50
50
100
25
48
50.00
50
50
100
25
50
50.00
0.1
5.0
50
50
100
28
55
56.00
52.00 ± 3.46c
注
:
*
平均再生率表示为平均值
±
标准误，不同字母表示
0.05
水平下差异显著
Note:
*
Average frequency of regeneration presented as mean ± SE, with different letters indicating significant differences at the 0.05
level
50 mg/L CH
、
0.6 mol/L D-
甘露醇、
0.05 mg/L 2,4-D
、
0.5 mg/L KT
和
1%
蔗糖的培养基
(pH 5.8, P
1
培养基
)
中进行培养。培养
1~2 d
后，大多数原生质体开始
形成新的细胞壁。培养
2~3 d
后，原生质体开始第
一次细胞分裂，之后持续进行分裂形成细胞团。培
养
2
周后，原生质体的植板效率达到
50%
左右。培
养
4
周后，形成肉眼可见的细胞团
(
图
2B)
。
培养
4
周后，将培养基
(P
2
培养基
)
的
D-
甘露醇
浓度降至
0.3 mol/L
，蔗糖浓度增至
2%
，其他条件
不变，继续培养
4
周后，再培养在含有
0.05 mg/L
2,4-D
、
0.5 mg/L KT
和
3%
蔗糖的
MS
培养基
(P
3
培养基
)
中，细胞团迅速生长。植板
10~12
周后，原
生质体生长成为直径约
1~3 mm
的小愈伤组织。甘
薯近缘野生种
I. cordatotriloba
的小愈伤组织为白
色、结构松软
(
图
2C)
。
将直径达到
1~3 mm
的小愈伤组织转移到增殖
培养基上后，愈伤组织增殖迅速。转移
3
周后，愈
伤组织的直径达到
5~10 mm
， 愈伤组织仍为白色，
结构疏松
(
图
2D)
。将增殖得到的愈伤组织转移到分
化培养基上
1
周后，愈伤组织开始变绿，陆续长出
不定根。在分化培养基上培养
4~6
周后，将愈伤组
织转移到
MS
基本培养基上进行培养，愈伤组织再
生出植株。
I. cordatotriloba
的原生质体再生植株大
部分是从愈伤组织分化的粗根上再生出来的
(
图
2E)
。将再生的小植株转移到新鲜的
MS
基本培养基
上进行培养，获得了完整的再生植株
(
图
2F)
。
现将
I. cordatotriloba
的原生质体植株再生结果
列于表
2
中。从表
2
可以看出，在添加
0.1 mg/L IAA
和
5.0 mg/L BAP
的分化培养基上实现了高频率的
植株再生，再生率达
50.98%
，说明叶柄是
I.