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水生生物研究
, 2012
年
,
第
1
卷
,
第
7-13
页
Shuisheng Shengwu Yanjiu, 2012, Vol.1, 7-13
http://aor.5th.sophiapublisher.com
11
表
2 Tail-PCR
反应程序
Table 2 Procedure of Tail-PCR
反应
程序号
循环数
反应条件
Reaction
File No.
Cycle No.
Thermal condition
第一轮
1
1
92
℃
3 min; 95
℃
1 min
1
st
amplification
2
5
94
℃
30 s; 60
℃
1 min; 72
℃
2 min 30s
3
1
94
℃
30 s; 28
℃
2 min, ramping to 72
℃
0.3
℃
/s; 72
℃
2 min
4
10
94
℃
30 s; 42
℃
1 min; 72
℃
2 min 30 s
5
1
94
℃
30 s; 60
℃
1 min; 72
℃
2 min 30 s
6
14
94
℃
30 s; 60
℃
1 min; 72
℃
2 min 30 s
94
℃
30 s; 42
℃
1 min; 72
℃
2 min 30 s
7
1
72
℃
5 min
第二轮
1
1
92
℃
3 min; 95
℃
1 min
2
nd
amplification
8
15
94
℃
30 s; 58
℃
1 min; 72
℃
2 min 30 s
94
℃
30 s; 58
℃
1 min; 72
℃
2 min 30 s
94
℃
30 s; 58
℃
1 min; 72
℃
2 min 30 s
第三轮
7
1
72
℃
5 min
3
rd
amplification
同第二轮
(The same with secondary)
3.5 PCR
产物的回收和测序
以上
PCR
产物经
1%
的琼脂胶电泳分离，切下
目的条带，用
OMEGA Gel Extraction Kit
试剂盒回
收。纯化产物连接至
PGM
-
18T
载体，转化到
top10
感受态细胞中，菌落
PCR
筛选阳性克隆，提取质粒，
送博尚生物公司测序。
3.6
序列的生物信息学分析
利用
DNAMAN
软件进行核苷酸及氨基酸序列
分析，由
PLACE (http://www.dna.affrc.go.jp/PLACE
/signalscan.html)
预测启动子调控元件及转录起始位
点。
Splign (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sutils/splign/
splign.cgi)
进行内含子分析。
作者贡献
孙科军是本研究的试验执行者，完成了采样、基因克隆、
数据分析以及论文初稿的撰写与修改；刘希良、王开卓和陈
敦学参与了试验的采样和数据分析工作；陈韬和张建社为
本研究立意指导；成嘉和褚武英参与本研究的实验设计、
论文修改。
致谢
感谢孙志良教授的精心指导和大力支持。
参考文献
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