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计算分子生物学
(
网络版
), 2012
年
,
第
1
卷
,
第
4
篇
,
第
23
-
28
页
Jisuan Fenzi Shengwuxue (Online), 2012, Vol.1, No.4, 23
-
28
http://cmb.5th.sophiapublisher.com
24
运用
RAPD (random amplified polymorphic
DNA)
技术
(Welsh and Mclelland, 1990; Williams et
al., 1990)
，从分子水平上对圈养群体黑颈长尾雉的
遗传多样性进行研究，以期了解其遗传多样性背
景、群体内和群体间遗传分化水平，为其生物资源
的种质保存、遗传改良及进一步的开发利用提供科
学依据。
1
结果与分析
1.1 RAPD
扩增带谱分析
在
50
条随机引物中，筛选获得了
14
条引物能
够产生重复的、清晰的扩增图谱，并以此进行分析
(
表
1)
。使用筛选得的
14
条随机引物对
24
只黑
颈长尾雉进行
PCR
扩增，每条引物可产生
6~12
条
特定的扩增谱带
(
图
1)
，从图看出，
RAPD
扩增产物
清晰并且丰富，说明对黑颈长尾雉
RAPD
反应各参
数的筛选是适合的、正确的。黑颈长尾雉的
RAPD
扩增谱带变异较大，
14
条引物的
RAPD
产物共检测
到
119
个位点，其中
98
个为多态性位点，占
82.35%
，
标记的分子量在
0.2~3 kb
之间。不同的引物所得到
的扩增片段的数量各不相同。同时，不同的引物所
揭示的多态性也不尽相同。
图
1
引物
S1407
扩增的
24
只黑颈长尾雉个体的
RAPD
产物
电泳图
Figure 1 Electrophoretogram of typical RAPD band patterns
produced by S1407 primers with 24 individuals of
Syrmaticus
humiae
1.2
黑颈长尾雉的遗传多样性
用软件
NTsys 2.10e
进行分析，得到黑颈长尾
雉
24
只个体的遗传距离
P
值矩阵
(
表
2)
。任意两个
个体的
P
值在
0.159 7~0.487 4
范围之内。并依据
24
只黑颈长尾雉个体之间相互关系构建分支聚类图
(
图
2)
。黑颈长尾雉种群的平均遗传距离为
0.281 0
，
即是说种群内个体的相似程度为
0.719 0
。
2
讨论
由于
RAPD
技术具有良好的分辨率
(Welsh and
Mclelland, 1990; Williams et al., 1990)
，遗传距离及
聚类分析揭示了黑颈长尾雉的遗传变异水平。黑颈
长尾雉种群的平均遗传距离为
0.281 0
，即是说种群
表
1 14
条引物序列及
RAPD
扩增分析
Table 1 14 primers squences and the results of RAPD
引物
Primers
引物碱基序列
(5’
-
3’)
Primer sequence (5’
-
3’)
扩增条带数
Total number of
bands
多态性条带数
Number of
polymorphic bands
多态率
(%)
Percentage of polymorphic
bands (%)
S92
CAGCTCACGA
9
7
77.78
S93
CTCTCCGCCA
6
4
66.67
S103
AGACGTCCAC
8
6
75.00
S104
GGAAGTCGCC
7
6
85.71
S105
AGTCGTCCCC
6
5
83.33
S1181
GGCAGGTGGA
8
7
87.50
S1186
ACGGATCCCC
10
8
80.00
S1345
TCGCTGCGTT
8
5
62.50
S1348
AGGCTTCCCT
11
10
90.91
S1402
GGAAACCCCT
10
10
100.00
S1404
GGCACGCGTT
12
11
91.67
S1406
GTGGCTTGGA
8
6
75.00
S1407
GTAAACCGCC
9
8
88.89
S1409
GGGCGACTAC
7
5
71.43
总计
Total
119
98
82.35