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基因组学与生物技术
(
网络版
), 2014
年
,
第
3
卷
,
第
4-7
页
Jiyinzuxue Yu Shengwu Jishu (Online), 2014, Vol.3, 4-7
http://gb.biopublisher.cn
Copyright © 2014 Biopublisher
4
技术主题
Technology Feature
脉冲场凝胶电泳分析
Bt
菌质粒谱的方法
周燕
1,2
，黄飞燕
1,2
，
李莉
1,2
，
赵从
2
，
朱锦天
2
通讯作者：
Crystal.Z.Chow@gmail.com
作者
1
亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，广西大学生命科学技术学院，南宁，广西，中国
2
海南省热带农业资源研究所，三亚，海南，中国
基因组学与生物技术
, 2014
年
,
第
3
卷
,
第
2
篇
doi: 10.5376/gb.cn.2014.03.0002
本文首次以英文发表在
Bt Research, 2014, Vol.5, No.1
上。现依据版权所有人授权的许可协议，采用
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,
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义，请以英文原文为准。
引用格式：
Zhou, 2014, Protocol for Analyzing Plasmid Profiles of
Bacillus thuringiensis
by Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), Bt Research, 2014,
Vol.5, No.1, 1-4 (doi:10.5376/bt.2014. 05.0001)
摘
要
Bt
菌株一般含有
1
个到
10
多个大小不等的质粒，分子量在
10 Kb
至
600 Kb
以上不等。
Bt
菌株的质粒谱特征是鉴
定
Bt
菌株的重要依据。用常规的电泳凝胶方法分离分子质量大于
25 Kb
的质粒
DNA
分子是很难的，而脉冲场琼脂糖电泳
技术
(Pulsed Field Gel Electrophoresis, PFGE)
分离鉴定质粒谱的理想的选项之一。
PFGE
的原理主要是利用有规律的改变电场
方向和大小，从而使大分子
DNA
得以分离。我们通过对
10
个
Bt
菌株大质粒的分离鉴定的基础上提出了本实验方法，利用
本
PFGE
实验方法能对
Bt
菌株质粒的数量、大小以及单个大质粒的分离获得理想的实验结果。
关键词
Bacillus thuringiensis
;
脉冲场凝胶电泳
;
质粒谱
Protocol for Analyzing Plasmid Profiles of
Bacillus thuringiensis
by Pulsed Field
Gel Electrophoresis (PFGE)
Yan Zhou
1,2
, Feiyan Huang
1,2
, Li Li
1,2
, Cong Zhao
2
, Jintian Zhu
2
1. State Key Laboratory for Conservation and Utilization of Subtropical Agro-Bioresources, College of Life Science and Technology of Guangxi University,
Nanning, Guangxi, China
2. Hainan Tropical Agricultural Resources Institute, Sanya, Hannan, China
Corresponding author, Crystal.Z.Chow@gmail.com;
Authors
Abstract
Bacillus thuringiensis
commonly contains 1 to 10 plasmids with different molecular weights ranging from 10 Kb to more
than 600 Kb. The characteristic plasmid profile of Bt strain is an important basis for distinguishing Bt strains. It is very hard to
separate plasmid DNAs with molecular mass greater than 25 Kb by using conventional gel electrophoresis method, whereas the
pulsed field gel electrophoresis (PFGE) is one of the more ideal methods for separating and identifying the plasmid profiles. The
principle of PFGE relies on taking advantage of regular changes in direction and size of electric field which enable the separation of
high molecular weight DNAs. We proposed the experimental protocol based on the separation and identification of plasmids in 10 Bt
strains. Ideal experimental results regarding the number and size of plasmids as well as the isolation of single large plasmid were
achieved using PFGE protocol.
Keywords
Bacillus thuringiensis
; Pulsed field gel electrophoresis (PFGE); Plasmid profile
引言
Bacillus thuringiensis
，简称
Bt
，是革兰氏阳
性、芽孢形成菌，归属到芽孢杆菌属的
Bacillus
cereus
sensu latu
亚组。
Bacillus cereus
sensu latu
亚组包含
B. Cereus
,
B. anthracis
,
B. thuringiensis,
B. mycoides
,
B. pseudomycoides
,
和
B.
weihenstephanensis
六个成员组成，与
Bacillus
cereus
亚组其他成员相比，这些菌株的显著不同
之处在于质粒数量、功能的不同。
Bt
菌株一般含
有数个大小不等的质粒，分子量均在
10 Kb
至
600 Kb
以上不等
(Wang, 2011)
。研究表明大多数
Bt
伴胞晶体蛋白的编码基因定位于大质粒上。
收稿日期：
2014
年
05
月
15
日
接受日期：
2014
年
06
月
11
日
发表日期：
2014
年
06
月
18
日