基本HTML版本
基因组学与生物技术
(
网络版
), 2012
年
,
第
1
卷
,
第
54-
页
Jiyinzuxue Yu Shengwu Jishu (Online), 2012, Vol.1, 54-56
http://gb.biopublisher.cn
55
日本生产
(
图
1)
，图像的分辨率可高达
4080×3072
像素。利用油镜镜头，最大放大倍数可达
1000
倍。
图
1
本研究使用的
OLYMPUS DP70
显微镜
Figure 1 The Olympus Digital Microscope DP70 Model used
in this study
显微镜（油镜）观察的操作步骤：
(1)
样品对焦：先用低倍物镜对样品对焦。
(2)
香柏油覆盖样品：油镜下在盖玻片上滴一滴香
柏油。
(3)
聚焦观察：调节细准焦螺旋。
(4)
观察记录：眼睛观察，找到合适视野，记录、
照相
;
观察完毕，下降载物台，将油镜头转出，取
下载玻片。
(5)
镜头清洁：先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用
少许无水乙醇擦去镜头上残留油迹，最后最后擦
干清洗剂。
2
化学试剂及配制
吸取
10 mL A
溶液
(A:
碱性复红
[
又称碱性品
红，
fuchsin] 1 g;
无水乙醇
10 mL (10%w/v))
与
90 mL B
液
(B:
石炭酸
(
苯酚
)5 g,
溶于
mili-Q
超纯
水
100 mL (5%w/v))
，充分混合成石炭酸复红液，
4
℃保存。使用前稀释
10
倍，再用
Pall Supor®
Membrane 0.45 μm
滤器过滤除菌，待用。
3
实验流程
3.1
制备观察菌液
将新鲜活化的
Bt
菌株在
NB
培养平板上
30
℃
倒置培养
72 h
以上，至芽孢完全形成。
3.2
制片
(1)
取一滴
ddH
2
O
点在载玻片中央，挑取少量菌
苔在水滴中反复涂布均匀。
(2)
当水滴充分风干，可微火加热使水分加快蒸
发。
(3)
将已干燥的涂片在微火上迅速通过
2-3
次，使
菌体与玻片结合牢固。
(4)
待切片冷却即可进入染色步骤。
3.3
染色
(1)
滴加石炭酸复红染液于涂片上，室温染色
30~60S
。
(2)
然后倾去染液，用水清洗至无色。
(3)
盖上盖玻片，准备观察。
3.4
观察
(1)
将切片置于显微镜
100X
油镜下进行观察：调
节粗调旋钮，让油镜浸没在松柏油中，尽量靠近
观察玻片，但不要让镜头接触到玻片。然后轻微
调节旋钮使物镜缓慢上升至图像出现，然后调节
微调旋钮至图像清晰可见。
(2)
镜检时，晶体蛋白呈红色，芽孢呈无色。
3.5
拍照
设置显微镜照相系统的各种拍照参数，调节
好背景颜色。注意每张照片上要有标尺，一般取
10μm
。
4
例证分析
Bt
的最主要特征就是在生长后期产生芽孢和
伴孢晶体，因此可以在这个时期用显微镜来观察。
本案例中，我们以
Bt
分离株
S2160-1 (Zhang et al.,
2012)
、模式菌株
HD-73
为实验材料，采用石炭酸
复红染液色的方法对生长后期的
Bt
菌进行染色镜
鉴。如图
2
观察结果显示，在以红色或浅红色为
背景下，
2
个菌株都能观察到无色的芽孢；
HD-73
都为红色的菱形晶体，
S2160
为红色圆形晶体。
5
讨论
要获得高质量的显微镜观察照片，实验过程